1、应用分子克隆技术和生物测序技术，采用推荐的EV71检测引物序列（PO）对于手足口病爆发期的病人进行手足口常见病原EV71和CA16快速筛选：比对我国常见BV71毒株（阜阳株、深圳株、香港株）和美国原始毒株BrCr VP1、3区核苷酸序列，针对上述序列相对保守区设计引物P2、p4引物，扩增08年山东13个县市区及1个河北某县HFMD病人的EV71 vP1区核苷酸序列，生物测序后进行基因型分析，与已公布手足口常见病毒EV71进行同源性比对，构建遗传进化树。 2、通过分析VP1核苷酸序列，在我国大陆流行的EV71变异较小，将为EV71的基础研究和应用研究提供一个较完整清楚的分子生物学背景，为我国的EV71病毒的流行病学调查及其预防和诊断试剂的开发等研究奠定基础。HFID病人T淋巴细胞百分率低下，尤其是CD4淋巴细胞的显著下降，对病情评估具有实际意义，为今后进一步完善和修订“肠道病毒（EV71）感染诊疗指南”提供了重要依据。 3、实验室检测手足口病人T淋巴细胞亚群（CD3、CD4和CD8），比较手足口患儿和正常健康儿童细胞免疫差异度；对比并发脑炎手足口患儿与非脑炎手足口患儿CD3-4-8差异，分析T淋巴细胞亚群百分率与手足口病情的关联性。 手足口病（HFMD）是以亚太地区为主世界范围广泛流行的肠道病毒传染病，严重危害儿童身体健康。目前尚无统一手足口病实验室诊断标准，根据我国大陆流行的EV71变异较小的特点，本实验针对临床各种样本中PCR实验室诊断方法进行研究和评估，探讨RT-PCR-生物测序法、实时荧光定量PCR法检测粪便和脑脊液中EV71的可行性，以期为HFMD诊断提供可靠的实验室定性、定量检测方法。 本实验针对山东部分地区近期暴发HFlyD病原EV71阳性样本进行VP1序列进行分子分型和遗传进化归属分析，为进一步疫苗研制建立理论基础，并为EV71的基础研究和应用研究提供一个较完整清楚的分子生物学背景。 通过分析1000余例HFID病人实验室诊断结果，得出该病的实验室诊断特点，为临床诊断HFMD和判断病情提供良好的辅助手段。

1、应用分子克隆技术和生物测序技术，采用推荐的EV71检测引物序列（PO）对于手足口病爆发期的病人进行手足口常见病原EV71和CA16快速筛选：比对我国常见BV71毒株（阜阳株、深圳株、香港株）和美国原始毒株BrCr VP1、3区核苷酸序列，针对上述序列相对保守区设计引物P2、p4引物，扩增08年山东13个县市区及1个河北某县HFMD病人的EV71 vP1区核苷酸序列，生物测序后进行基因型分析，与已公布手足口常见病毒EV71进行同源性比对，构建遗传进化树。 2、通过分析VP1核苷酸序列，在我国大陆流行的EV71变异较小，将为EV71的基础研究和应用研究提供一个较完整清楚的分子生物学背景，为我国的EV71病毒的流行病学调查及其预防和诊断试剂的开发等研究奠定基础。HFID病人T淋巴细胞百分率低下，尤其是CD4淋巴细胞的显著下降，对病情评估具有实际意义，为今后进一步完善和修订“肠道病毒（EV71）感染诊疗指南”提供了重要依据。 3、实验室检测手足口病人T淋巴细胞亚群（CD3、CD4和CD8），比较手足口患儿和正常健康儿童细胞免疫差异度；对比并发脑炎手足口患儿与非脑炎手足口患儿CD3-4-8差异，分析T淋巴细胞亚群百分率与手足口病情的关联性。 手足口病（HFMD）是以亚太地区为主世界范围广泛流行的肠道病毒传染病，严重危害儿童身体健康。目前尚无统一手足口病实验室诊断标准，根据我国大陆流行的EV71变异较小的特点，本实验针对临床各种样本中PCR实验室诊断方法进行研究和评估，探讨RT-PCR-生物测序法、实时荧光定量PCR法检测粪便和脑脊液中EV71的可行性，以期为HFMD诊断提供可靠的实验室定性、定量检测方法。 本实验针对山东部分地区近期暴发HFlyD病原EV71阳性样本进行VP1序列进行分子分型和遗传进化归属分析，为进一步疫苗研制建立理论基础，并为EV71的基础研究和应用研究提供一个较完整清楚的分子生物学背景。 通过分析1000余例HFID病人实验室诊断结果，得出该病的实验室诊断特点，为临床诊断HFMD和判断病情提供良好的辅助手段。