| 成果基本信息 | ||||||
| 关键词: | 胰岛细胞;低密度脂蛋白;大鼠;体外培养 | |||||
| 成果类别: | 应用技术 | 技术成熟度: | 初期阶段 | |||
| 体现形式(基础理论类): | / | 体现形式(应用技术类): | 其他应用技术 | |||
| 成果登记号: | 2007Y0095 | 资源采集日期: | 09-3-20 | |||
| 研究情况 | |||||
| 单位名称: | 甘肃省人民医院 | 技术水平: | 国内领先 | ||
| 评价证书号: | / | 评价单位: | 甘肃省科技厅 | ||
| 评价日期: | 2007.04.06 | 评价证书号: | / | ||
| 转化情况 | |||||
| 转让范围: | 不转让 | 推广形式: | 合作开发 | ||
| 已转让企业数(个): | 0 | ||||
| 联系方式 | |||||
| 联系人(平台): | 孵化基地 | 联系人(平台)电话: | 0771-3394012 | ||
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| 成果简介 | |||||
该课题是自选项目。 其主要应用领域为临床医学,是糖尿病发病机制的基础研究。 在大鼠和人胰腺β细胞上表达高亲和性低密度脂蛋白受体(LDLR),它可以识别和结合所有脂蛋白。因此胰腺β细胞可以摄取低密度脂蛋白(LDL),LDL进入β细胞内发挥其作用。氧化损伤是引起许多组织细胞发生凋亡的一个重要机制。与其他组织细胞相比较,胰岛细胞内抗氧化物酶,如过氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肤过氧化物酶等水平较低,因此,在一些因素的诱发下,胰岛β细胞容易发生氧化应激反应。氧化和抗氧化作用失衡所致氧化应激引起胰岛β细胞损伤是糖尿病发生发展的一个重要机制。 主要的研究技术有:(1)大鼠胰岛细胞的分离纯化;(2)胰岛细胞培养、胰岛细胞活性鉴定、胰岛细胞活力测定;(3)胰岛细胞生物学活性鉴定;(4)LDL诱导的体外培养胰岛细胞凋亡的观察:①MTT比色法,②透射电镜观察LDL诱导的细胞凋亡 ③DNA片段化检测 国外对胰岛细胞的研究较早,有关脂肪酸对胰岛细胞影响的研究较多,且多为体内的研究。而国内对胰岛细胞研究较晚,脂蛋白对胰岛细胞影响的研究尚属空白。本研究主要是通过观察低密度脂蛋白对体外培养Wistar大鼠胰岛细胞分泌功能的影响及诱导的胰岛细胞凋亡作用的实验研究,来探讨低密度脂蛋白对体外培养胰岛细胞的毒性作用及可能机制。用凝胶酶反复短时间消化胰腺组织,细胞接种后及时转板的方法可获得纯度较高、生长良好、适合实验研究的胰岛单层细胞。LDL对体外培养的大鼠胰岛细胞分泌功能有一定的影响,影响程度与LDL浓度有关,表现为LDL抑制高糖刺激下的胰岛素分泌,并且这种抑制作用随浓度增加而加强,呈剂量依赖性。LDL可诱导体外培养的Wistar大鼠胰岛细胞凋亡,凋亡程度与LDL浓度有关。 低密度脂蛋白对体外培养胰岛细胞的毒性作用及可能机制的研究,可以进一步从脂毒性方面来揭示糖尿病的一些可能发病机理,为糖尿病的发病机制提供了新思路。这些可以为我们临床上治疗和预防糖尿病提供可靠的理论证据,开辟糖尿病防治新领域。 通过观察低密度脂蛋白(LDL)对体外培养Wista:大鼠胰岛细胞分泌功能的影响及诱导的胰岛细胞凋亡作用的实验研究,来探讨低密度脂蛋白对体外培养胰岛细胞的毒性作用及可能机制。 结果表明不同浓度LDL作用胰岛细胞,低糖(2.8mmol/L)刺激下各组胰岛素分泌量无显著性差异,高糖(16.7mmol/L)刺激下各组胰岛素分泌量显著减少;LDL和维生素E、C共同培养,与LDL组比较,高糖刺激下胰岛素分泌水平增加。LDL作用胰岛,电镜观察细胞核染色质边集,固缩、凝结成块,琼脂糖凝胶电泳图呈典型的DNA梯状带。 国外对胰岛细胞的研究较早,且多为体内的研究。而国内对胰岛细胞研究较晚,脂蛋白对胰岛细胞影响的研究尚属空白。本项研究成果,是对糖尿病发病机理的新的探索。 |