1、应用领域：通过选择对软骨细胞的细胞外基质（ECM ）合成具有促进作用的TGF-β1基因转染脂肪干细胞（ADSCs），观察转染后目的基因的稳定表达和对软骨细胞外基质(ECM)的两种重要组分：Ⅱ型胶原(ColⅡ)和aggrecan的合成，为构建新型的组织工程软骨提供实验依据。 2、技术原理：TGF-β1对ECM的形成有重要作用，TGF-β1 能促进体外培养软骨细胞合成Ⅱ型胶原，有研究表明它可以促进ADSCs的软骨分化。但体外培养中添加TGF-β1易流失，且TGF-β1因子价格昂贵，为维持细胞表型和防止细胞退变，需不断添加TGF-β1，因此结合应用转基因技术，将能够促进软骨细胞ECM合成的目的基因导入其中，并筛选阳性细胞克隆株，即稳定转染ADSCs，RT-PCR检测TGF-β1、纤连蛋白(FN)、Ⅱ型胶原（ColⅡ）、Aggrecan的表达； Western -blot检测TGF-β1 蛋白的表达。 基因工程技术应用于组织工程领域有其独特的优势：转化细胞可持续高效表达目的基因以调控其自身及其它效应细胞的生长；转染细胞合成分泌的内源性蛋自具有更多可识别的配体，能更有效地同细胞表面受体结合使其表达产物活性更高，所需产物量更小(ng或pg水平)，减少了外源性重组蛋白(mg或μg)反复使用的副作用等。价格远低于纯化的重组蛋白。因此，结合应用转基因技术，构建一种基因修饰的组织工程软骨非常具有意义。 3、性能指标：TGF-β1基因转染脂肪干细胞及阳性细胞克隆株的筛选； RT-PCR检测TGF-β1、纤连蛋白(fibronectin,FN)、Ⅱ型胶原（ColⅡ）、Aggrecan的表达； Western -blot检测TGF-β1。 4、与国内外同类技术的比较：目前国内外有文献报道采用添加TGF-β1因子诱导脂肪干细胞的报道，但体外培养中添加TGF-β1易流失，且TGF-β1因子价格昂贵，为维持细胞表型和防止细胞退变，需不断添加TGF-β1因子，国内有文献报道TGF-β1基因转染ATSCs，但是采用的是瞬时转染技术，该技术的缺点是作用时间短，不能随细胞的传代而传代，因此，不可避免的会出现细胞的退变。本研究采用稳定转染的技术，即将TGF-β1基因插入到ATSCs细胞核的基因组中，可以随细胞的传代而传代，可持续高效的表达TGF-β1因子，将ATSCs诱导分化为软骨细胞的同时，能有效的防止细胞的退变。目前国内尚未见TGF-β1基因稳定转染脂肪干细胞的文献报道。

1、应用领域：通过选择对软骨细胞的细胞外基质（ECM ）合成具有促进作用的TGF-β1基因转染脂肪干细胞（ADSCs），观察转染后目的基因的稳定表达和对软骨细胞外基质(ECM)的两种重要组分：Ⅱ型胶原(ColⅡ)和aggrecan的合成，为构建新型的组织工程软骨提供实验依据。 2、技术原理：TGF-β1对ECM的形成有重要作用，TGF-β1 能促进体外培养软骨细胞合成Ⅱ型胶原，有研究表明它可以促进ADSCs的软骨分化。但体外培养中添加TGF-β1易流失，且TGF-β1因子价格昂贵，为维持细胞表型和防止细胞退变，需不断添加TGF-β1，因此结合应用转基因技术，将能够促进软骨细胞ECM合成的目的基因导入其中，并筛选阳性细胞克隆株，即稳定转染ADSCs，RT-PCR检测TGF-β1、纤连蛋白(FN)、Ⅱ型胶原（ColⅡ）、Aggrecan的表达； Western -blot检测TGF-β1 蛋白的表达。 基因工程技术应用于组织工程领域有其独特的优势：转化细胞可持续高效表达目的基因以调控其自身及其它效应细胞的生长；转染细胞合成分泌的内源性蛋自具有更多可识别的配体，能更有效地同细胞表面受体结合使其表达产物活性更高，所需产物量更小(ng或pg水平)，减少了外源性重组蛋白(mg或μg)反复使用的副作用等。价格远低于纯化的重组蛋白。因此，结合应用转基因技术，构建一种基因修饰的组织工程软骨非常具有意义。 3、性能指标：TGF-β1基因转染脂肪干细胞及阳性细胞克隆株的筛选； RT-PCR检测TGF-β1、纤连蛋白(fibronectin,FN)、Ⅱ型胶原（ColⅡ）、Aggrecan的表达； Western -blot检测TGF-β1。 4、与国内外同类技术的比较：目前国内外有文献报道采用添加TGF-β1因子诱导脂肪干细胞的报道，但体外培养中添加TGF-β1易流失，且TGF-β1因子价格昂贵，为维持细胞表型和防止细胞退变，需不断添加TGF-β1因子，国内有文献报道TGF-β1基因转染ATSCs，但是采用的是瞬时转染技术，该技术的缺点是作用时间短，不能随细胞的传代而传代，因此，不可避免的会出现细胞的退变。本研究采用稳定转染的技术，即将TGF-β1基因插入到ATSCs细胞核的基因组中，可以随细胞的传代而传代，可持续高效的表达TGF-β1因子，将ATSCs诱导分化为软骨细胞的同时，能有效的防止细胞的退变。目前国内尚未见TGF-β1基因稳定转染脂肪干细胞的文献报道。