技术说明： 　　本课题应用基因重组技术，将结核杆菌热休克蛋白（HSP70）与HPV16E6/E7基因重组，构建重组表达质粒，体外高效表达融合蛋白。通过体内外实验，确证该融合蛋白能诱导出特异性的抗HPV16的细胞免疫及体液免疫反应，能诱发抗肿瘤的特异性CTL反应，并能使荷瘤小鼠肿瘤的体积缩小，甚至消失。为最终成功开发宫颈癌治疗性疫苗打下基础。 　　主要的技术及指标有: 　　1、PCR技术:对扩增产物进行核酸电泳以行验证。 　　2、基因重组技术:设计含相应的酶切片段的引物将不同的基因重组在一起，利用PCR和酶切技术验证重组体是否重组成功。 　　3、融合蛋白的表达技术:分别选用不同的表达载体进行筛选，利用SDS-PAGE最终选择能高效表达融合蛋白的载体并进行表达。 　　4、细胞培养技术:体外培养宫颈癌细胞株。 　　5、其它:光学及电子显微镜技术，免疫组织化学技术，ELISA技术等等。 　　应用前景： 　　本项目研究取得的结果如下： 　　1、完成了结核杆菌HSP70、HPV16 E6/E7基因的PCR扩增、并成功构建了各重组表达载体。 　　2、成功筛选出能表达融合蛋白的原核表达系统，并完成融合蛋白的初步纯化。 　　3、成功建立了宫颈癌皮下荷瘤裸鼠动物模型。 　　4、HPV16 E6/E7与HSP70融合蛋白疫苗可抑制宫颈癌荷瘤裸鼠瘤体的生长，能增强裸鼠脾淋巴细胞分泌mIFNγ。尚未发现能使荷瘤裸鼠瘤体消失。 　　与预期目标还有相当的距离。目前不具备推广应用的条件。

　　技术说明： 　　本课题应用基因重组技术，将结核杆菌热休克蛋白（HSP70）与HPV16E6/E7基因重组，构建重组表达质粒，体外高效表达融合蛋白。通过体内外实验，确证该融合蛋白能诱导出特异性的抗HPV16的细胞免疫及体液免疫反应，能诱发抗肿瘤的特异性CTL反应，并能使荷瘤小鼠肿瘤的体积缩小，甚至消失。为最终成功开发宫颈癌治疗性疫苗打下基础。 　　主要的技术及指标有: 　　1、PCR技术:对扩增产物进行核酸电泳以行验证。 　　2、基因重组技术:设计含相应的酶切片段的引物将不同的基因重组在一起，利用PCR和酶切技术验证重组体是否重组成功。 　　3、融合蛋白的表达技术:分别选用不同的表达载体进行筛选，利用SDS-PAGE最终选择能高效表达融合蛋白的载体并进行表达。 　　4、细胞培养技术:体外培养宫颈癌细胞株。 　　5、其它:光学及电子显微镜技术，免疫组织化学技术，ELISA技术等等。 　　应用前景： 　　本项目研究取得的结果如下： 　　1、完成了结核杆菌HSP70、HPV16 E6/E7基因的PCR扩增、并成功构建了各重组表达载体。 　　2、成功筛选出能表达融合蛋白的原核表达系统，并完成融合蛋白的初步纯化。 　　3、成功建立了宫颈癌皮下荷瘤裸鼠动物模型。 　　4、HPV16 E6/E7与HSP70融合蛋白疫苗可抑制宫颈癌荷瘤裸鼠瘤体的生长，能增强裸鼠脾淋巴细胞分泌mIFNγ。尚未发现能使荷瘤裸鼠瘤体消失。 　　与预期目标还有相当的距离。目前不具备推广应用的条件。