“人骨髓间充质干细胞向胆碱能神经元分化研究”是江西省科技厅科研项目，申请时间为2006年1月。批准时间为2007年11月，批准经费1.2万元。研究正式开始于2006年1月，全部实验工作于2008年2月完成。 　　研究通过采用人骨髓间充质干细胞提取、体外培养、扩增以及培养中诱导其定向分化为胆碱能神经细胞等方法，观察人骨髓间充质干细胞的生长、以及定向分化为胆碱能神经细胞的标志等生物学征象，证明人骨髓间充质干细胞在适当条件能够定向分化成胆碱能神经细胞，从而为从人骨髓中获得间充质干细胞，并诱导分化成胆碱能神经细胞以利于治疗脑中风、老年性痴呆患者提供有价值的条件，其应用前景广泛，意义重大。目前对中枢神经系统的疾病和中枢神经系统损伤引起的神经系统功能障碍最佳的治疗方案是神经细胞移植以期恢复神经系统的正常功能。 　　1、分离的骨髓单个核细胞BMMNCs，体外培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs)、并传代扩增培养观察hMSCs生长特性：原代培养6h可见成纤维细胞样的细胞贴壁生长，24～48h贴壁细胞成长梭形、小角形、及椭圆形，成巢状生长。随后梭形细胞逐渐占优势，约18～21d铺满瓶底。消化传代后细胞生长速度快，形成均一的长梭形、多角形细胞，其它形态的细胞极少见，一般7～10d便可达到70%～80%融合，18d左右出现致密的贴壁层。 　　2、hMSCs经WHl-P131预处理，再在培养中加入hbFGF预诱导培养24h，然后加入ATRA、Shh诱导hMSCs向胆碱能神经细胞分化，其细胞形态学变化；加入ATRA和Shh诱导1h后均可观察到扁平细胞胞体向内收缩，呈圆形或椭圆形，并向周围长出较长的突起，5h后分化为简单双极或大的多极细胞，极少数为锥形，胞体能伸展很长的突触，呈典型的神经元样的细胞形态：对照组细胞形态无明显变化。 　　3、hMSCs诱导分化后神经元的免疫组化特征：实验组诱导后可见NSE、ChAT、GFAP等标志的表达，其中NSE为61.00±3.63%、ChAT为9.92±1.29%、GFAP为14.42±2.74%。对照组上述标志均为阴性。 　　本研究经查新认为：“国内未见有使用WHI-P131预处理利加入hbFGF预诱导后，再联合ATRA利Shh诱导hMSCs，最终使hMSCs向胆碱能神经元分化的报道”，研究具有自主创新。该项目研究达到了预期目标，研究水平达到了国际先进、国内领先水平。

　　“人骨髓间充质干细胞向胆碱能神经元分化研究”是江西省科技厅科研项目，申请时间为2006年1月。批准时间为2007年11月，批准经费1.2万元。研究正式开始于2006年1月，全部实验工作于2008年2月完成。 　　研究通过采用人骨髓间充质干细胞提取、体外培养、扩增以及培养中诱导其定向分化为胆碱能神经细胞等方法，观察人骨髓间充质干细胞的生长、以及定向分化为胆碱能神经细胞的标志等生物学征象，证明人骨髓间充质干细胞在适当条件能够定向分化成胆碱能神经细胞，从而为从人骨髓中获得间充质干细胞，并诱导分化成胆碱能神经细胞以利于治疗脑中风、老年性痴呆患者提供有价值的条件，其应用前景广泛，意义重大。目前对中枢神经系统的疾病和中枢神经系统损伤引起的神经系统功能障碍最佳的治疗方案是神经细胞移植以期恢复神经系统的正常功能。 　　1、分离的骨髓单个核细胞BMMNCs，体外培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs)、并传代扩增培养观察hMSCs生长特性：原代培养6h可见成纤维细胞样的细胞贴壁生长，24～48h贴壁细胞成长梭形、小角形、及椭圆形，成巢状生长。随后梭形细胞逐渐占优势，约18～21d铺满瓶底。消化传代后细胞生长速度快，形成均一的长梭形、多角形细胞，其它形态的细胞极少见，一般7～10d便可达到70%～80%融合，18d左右出现致密的贴壁层。 　　2、hMSCs经WHl-P131预处理，再在培养中加入hbFGF预诱导培养24h，然后加入ATRA、Shh诱导hMSCs向胆碱能神经细胞分化，其细胞形态学变化；加入ATRA和Shh诱导1h后均可观察到扁平细胞胞体向内收缩，呈圆形或椭圆形，并向周围长出较长的突起，5h后分化为简单双极或大的多极细胞，极少数为锥形，胞体能伸展很长的突触，呈典型的神经元样的细胞形态：对照组细胞形态无明显变化。 　　3、hMSCs诱导分化后神经元的免疫组化特征：实验组诱导后可见NSE、ChAT、GFAP等标志的表达，其中NSE为61.00±3.63%、ChAT为9.92±1.29%、GFAP为14.42±2.74%。对照组上述标志均为阴性。 　　本研究经查新认为：“国内未见有使用WHI-P131预处理利加入hbFGF预诱导后，再联合ATRA利Shh诱导hMSCs，最终使hMSCs向胆碱能神经元分化的报道”，研究具有自主创新。该项目研究达到了预期目标，研究水平达到了国际先进、国内领先水平。