(1)任务来源 　　“人骨髓间充质干细胞向多巴胺神经元分化研究”是江西省科技厅科研项目，申请时间为2006年1月。批准时间为2007年11月，批准经费1.2万元。研究正式开始于2006年1月。全部实验工作于2008年2月完成。 　　(2)应用领域和技术原理 　　本研究属于细胞生物学干细胞范畴，为干细胞生物学行为及其临床应用于神经系统疾病的治疗提供理论支持。研究通过采用人骨髓间充质干细胞提取、体外培养、扩增、以及培养中诱导其向分化为多巴胺能神经细胞等方法，观察入骨髓间充质干细胞的生长、细胞表面标志、以及定向分化为多巴胺能神经细胞的标志等生物学征象，证明人骨髓间充质干细胞在适当条件能够定向分化成多巴胺能神经细胞，从而为从人骨髓中获得间充质干细胞，并诱导分化成多巴胺神经细胞以利于治疗帕金森氏病患者提供有价值的条件，其应用前景广泛，意义重大。 　　(3)性能指标 　　课题实际完成的研究任务： 　　1、分离的骨髓单个核细胞BMMNCs，体外培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs)、并传代扩增培养观察hMSCs生长特性：原代培养24h～48h细胞贴壁；18～21d铺满瓶底，传代细胞生长速度快，呈多角形、长棱形，7～10d便可铺满瓶底70%～80%，18d左右出现致密的贴壁层。 　　2、流式细胞仪(FACS)检测证明第二代培养的hMSCs表面标志阳性率：强表达CD29(整合素家簇成员分子)93.2±6.0%，较强表达CDl05(血管膜糖蛋白)76.01±6.2%和CDl66(活化白细胞黏附分子)60.3±9.2%，少量表达CD34(造血祖细胞抗原)2.1±0.72%，HLA-DR(H型组织相溶性抗原)3.44±3.0%。 　　3、培养的hMSCs经WHI-P131(一种特异性JAK-STAT信号传导途径抑制剂)预处理48～72h、再加入hbFGF(人碱性成纤维细胞生长因子)预诱导24h后，细胞形态无明显变化，当两者培养中再加入ATRA(全反式维甲酸)(实验1组)或有无Shh(实验2组)诱导15rain后，再加hGDNF诱导5h，均可观察到扁平细胞胞体内缩小成圆形或椭圆形，并向四周长出突起，5h分化为简单双极或大的多极，极少数为锥形长突起，表现为典型的神经元样细胞形态，有立体感，折光增强，对照组细胞无变化。 　　4、免疫细胞化学染色证明经过诱导后：实验1组的神经细胞Nestin阳性率54.2±3.7%，NSE阳性率77.04±5.6%，GFAP阳性率8.84±2.4%，TH阳性率36.5±15.8%，DAT阳性率26.0±14.2%；实验2组的神经样细胞Nestin阳性率55.74-3.1%，NSE阳性率78.34-4.5%，GFAP阳性率10.04-2.6%，TH阳性率41.74-18.9%，DAT阳性率32.84-15.5%。两组p＜0.05。对照组细胞上述标志均阴性。 　　(4)与国内外同类技术比较 　　本研究经江西省医学科技查新中心检索查新认为：“国内未见有使用WHI-P131预处理和加入hbFGF预诱导后，再加入ATRA或有无Shh、以及hGDNF联合诱导人骨髓间充质细胞(hMSCs)分化成多巴胺能神经细胞的报道”，研究具有自主创新。 　　(5)成果的创造性、先进性 　　本研究在国内首先应用WHI-P131预处理和hbFGF预诱导，再经ATRA或有无Shh、以及再加hGDNF联合诱导，最终使分离纯化后的hMSCs向多巴胺神经元分化。该项目研究达到了预期目标，研究水平达到了国际先进、国内领先水平。 　　(6)作用意义(直接经济效益和社会意义) 　　目前对中枢神经系统的疾病和中枢神经系统损伤引起的神经系统功能障碍最佳的治疗方案是神经细胞移植以期恢复神经系统的正常功能，在治疗帕金森氏病方面神经细胞移植具有重要的意义。本研究展示了入骨髓间充质干细胞(hMSCs)在体外能够很好地诱导分化为多巴胺神经元，从而为临床移植治疗帕金森氏病展示了良好的前景。其不仅具有理论意义，同时具有良好的实用性的一种新治疗方法，且取材方便、安全，患者痛苦小，不存在组织配型及免疫排斥等问题，也不涉及伦理、法律等问题。本研究结果能产生很好地社会效益和间接的经济效益。 　　(7)推广应用的范围、条件和前景以及存在的问题和改进意见 　　本研究探讨了WHI-P131预处理和hbFGF预诱导，再经ATRA或有无Shh、以及再加hGDNF联合诱导hMSCs向多巴胺神经元分化，其可用于中枢神经系统帕金森氏病患者，从而为神经功能的恢复提供最佳的治疗手段。 　　本项目的推广需要得到患者的认可和同意，这是推广应用的关键。

　　(1)任务来源 　　“人骨髓间充质干细胞向多巴胺神经元分化研究”是江西省科技厅科研项目，申请时间为2006年1月。批准时间为2007年11月，批准经费1.2万元。研究正式开始于2006年1月。全部实验工作于2008年2月完成。 　　(2)应用领域和技术原理 　　本研究属于细胞生物学干细胞范畴，为干细胞生物学行为及其临床应用于神经系统疾病的治疗提供理论支持。研究通过采用人骨髓间充质干细胞提取、体外培养、扩增、以及培养中诱导其向分化为多巴胺能神经细胞等方法，观察入骨髓间充质干细胞的生长、细胞表面标志、以及定向分化为多巴胺能神经细胞的标志等生物学征象，证明人骨髓间充质干细胞在适当条件能够定向分化成多巴胺能神经细胞，从而为从人骨髓中获得间充质干细胞，并诱导分化成多巴胺神经细胞以利于治疗帕金森氏病患者提供有价值的条件，其应用前景广泛，意义重大。 　　(3)性能指标 　　课题实际完成的研究任务： 　　1、分离的骨髓单个核细胞BMMNCs，体外培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs)、并传代扩增培养观察hMSCs生长特性：原代培养24h～48h细胞贴壁；18～21d铺满瓶底，传代细胞生长速度快，呈多角形、长棱形，7～10d便可铺满瓶底70%～80%，18d左右出现致密的贴壁层。 　　2、流式细胞仪(FACS)检测证明第二代培养的hMSCs表面标志阳性率：强表达CD29(整合素家簇成员分子)93.2±6.0%，较强表达CDl05(血管膜糖蛋白)76.01±6.2%和CDl66(活化白细胞黏附分子)60.3±9.2%，少量表达CD34(造血祖细胞抗原)2.1±0.72%，HLA-DR(H型组织相溶性抗原)3.44±3.0%。 　　3、培养的hMSCs经WHI-P131(一种特异性JAK-STAT信号传导途径抑制剂)预处理48～72h、再加入hbFGF(人碱性成纤维细胞生长因子)预诱导24h后，细胞形态无明显变化，当两者培养中再加入ATRA(全反式维甲酸)(实验1组)或有无Shh(实验2组)诱导15rain后，再加hGDNF诱导5h，均可观察到扁平细胞胞体内缩小成圆形或椭圆形，并向四周长出突起，5h分化为简单双极或大的多极，极少数为锥形长突起，表现为典型的神经元样细胞形态，有立体感，折光增强，对照组细胞无变化。 　　4、免疫细胞化学染色证明经过诱导后：实验1组的神经细胞Nestin阳性率54.2±3.7%，NSE阳性率77.04±5.6%，GFAP阳性率8.84±2.4%，TH阳性率36.5±15.8%，DAT阳性率26.0±14.2%；实验2组的神经样细胞Nestin阳性率55.74-3.1%，NSE阳性率78.34-4.5%，GFAP阳性率10.04-2.6%，TH阳性率41.74-18.9%，DAT阳性率32.84-15.5%。两组p＜0.05。对照组细胞上述标志均阴性。 　　(4)与国内外同类技术比较 　　本研究经江西省医学科技查新中心检索查新认为：“国内未见有使用WHI-P131预处理和加入hbFGF预诱导后，再加入ATRA或有无Shh、以及hGDNF联合诱导人骨髓间充质细胞(hMSCs)分化成多巴胺能神经细胞的报道”，研究具有自主创新。 　　(5)成果的创造性、先进性 　　本研究在国内首先应用WHI-P131预处理和hbFGF预诱导，再经ATRA或有无Shh、以及再加hGDNF联合诱导，最终使分离纯化后的hMSCs向多巴胺神经元分化。该项目研究达到了预期目标，研究水平达到了国际先进、国内领先水平。 　　(6)作用意义(直接经济效益和社会意义) 　　目前对中枢神经系统的疾病和中枢神经系统损伤引起的神经系统功能障碍最佳的治疗方案是神经细胞移植以期恢复神经系统的正常功能，在治疗帕金森氏病方面神经细胞移植具有重要的意义。本研究展示了入骨髓间充质干细胞(hMSCs)在体外能够很好地诱导分化为多巴胺神经元，从而为临床移植治疗帕金森氏病展示了良好的前景。其不仅具有理论意义，同时具有良好的实用性的一种新治疗方法，且取材方便、安全，患者痛苦小，不存在组织配型及免疫排斥等问题，也不涉及伦理、法律等问题。本研究结果能产生很好地社会效益和间接的经济效益。 　　(7)推广应用的范围、条件和前景以及存在的问题和改进意见 　　本研究探讨了WHI-P131预处理和hbFGF预诱导，再经ATRA或有无Shh、以及再加hGDNF联合诱导hMSCs向多巴胺神经元分化，其可用于中枢神经系统帕金森氏病患者，从而为神经功能的恢复提供最佳的治疗手段。 　　本项目的推广需要得到患者的认可和同意，这是推广应用的关键。