本课题主要研究新型镧系元素螯合剂,用于均相时间分辨荧光免疫分析,克服目前使用的解离增强系统需要加入增强液,增强液易受环境洁净度及操作严密性影响等不足。我们合成的螯合剂采用异硫氰基作为与生物分子偶连的基团,在温和条件下即可与生物大分子偶连,充分保证生物大分子的活性。且无需加入增强液即可直接测定。该螯合剂在菲啰啉的2,9位引入N,N,N|,N|-四乙酸胺甲基结构,增大了菲啰啉结构的水溶性;羧基与铕离子形成稳定的离子键,并且螯合剂中四个氮原子和四个羧基以8个配位键牢固结合镧系离子,并使镧系离子处于化合物形成的穴状结构中,减少水分子的淬灭作用,使该试剂具有高的发光效率。该螯合剂是未知的,具有自主知识产权,已申请专利。经过两年半的研究,我们已经完成了目标化合物及主要中间体的合成及结构鉴定工作。红外光谱显示异硫氰基已经连接在苯环上,核磁共振氢谱显示出位移试剂铕的特殊位置。得到的螯合剂含量不低于97%,实验室小试总收率不低于7%。螯合剂激发波长为330nm,荧光测量波长为611nm。测量的线性范围为10-12-10-4mol/L,信噪比为4︰1,荧光寿命1ms。用该螯合剂对BSA进行标记,得到稳定的标记复合物,具有较高的标记率和较好的测量线性范围及测量灵敏度。该螯合剂在寡核苷酸标记,制备DNA探针,进行核酸杂交、基因诊断、靶细胞分析、受体分析、细胞免疫分析及免疫组化分析方面具有很好的应用前景。 |