本研究为杭州市医药卫生科技计划项目（编号：2005A009）。 流感和严重急性呼吸综合症（SARS）都是高接触性呼吸道传染病，易于飞沫传播，危害较大。做好呼吸道病毒的监测工作，对及早发现并控制疫情，减少经济损失具有重要意义。RT-PCR为基础的核酸检测方法以其灵敏、快速、操作简单等特点已被广泛地应用，而操作中需采用安全稳定的标准品和质控品进行质量控制。披甲RNA (armored RNA)是一种由大肠杆菌表达的包裹有目的RNA片断的重组MS2噬菌体，其可作为一种安全稳定的病毒替代品对核酸检测的整个过程进行质量控制。本研究利用原核表达技术研制出两种耐RNase的披甲RNA，并已于2006年申报国家发明专利。 (1)本研究组装了耐RNase的披甲RNA，并对包含和不包含pac位点两种构建策略进行了比较，结果表明pac位点可促进披甲RNA的组装及稳定性。 (2)本研究首次报道了针对甲型、乙型流感病毒和SARS冠状病毒，制备了内含三种病毒RNA片段的复合披甲RNA，可用作多种呼吸道病毒RT-PCR检测的标准品和质控品。 (3)首次报道了将甲3型流感M基因全长RNA包裹起来制备成披甲RNA，并用作甲型流感M基因检测的标准品和质控品。 (4)同时本研究首次建立了多重实时荧光RT-PCR方法，在一个PCR反应内同时检测甲型、乙型流感病毒和SARS冠状病毒，可为临床呼吸道感染的快速诊断提供更为准确和及时的实验室数据。 (5)以研制的披甲RNA为外对照，使用建立的多重实时荧光RT-PCR方法对290份呼吸道样品（咽拭子）进行检测，敏感性和特异性良好。 披甲RNA用作RT-PCR检测的标准品和质控品，可更大程度上保证操作过程中的生物安全性，并使得RT-PCR检测标准化、程序化，对更好地监测RNA病毒性传染病具有重大意义。两种披甲RNA均已在本实验室投入使用，应用前景广阔。本研究研制的披甲RNA和建立的多重实时荧光RT-PCR方法对提高传染性病毒检测的正确率，尽早发现、控制疫情提供一定保障，具有显著的社会效益和经济效益。 本研究已与中华实验和临床病毒学杂志发表论文1篇，与J Clin Microbio（2006年影响因子3.445）发表论文1篇，申请国家发明专利1项。

本研究为杭州市医药卫生科技计划项目（编号：2005A009）。 流感和严重急性呼吸综合症（SARS）都是高接触性呼吸道传染病，易于飞沫传播，危害较大。做好呼吸道病毒的监测工作，对及早发现并控制疫情，减少经济损失具有重要意义。RT-PCR为基础的核酸检测方法以其灵敏、快速、操作简单等特点已被广泛地应用，而操作中需采用安全稳定的标准品和质控品进行质量控制。披甲RNA (armored RNA)是一种由大肠杆菌表达的包裹有目的RNA片断的重组MS2噬菌体，其可作为一种安全稳定的病毒替代品对核酸检测的整个过程进行质量控制。本研究利用原核表达技术研制出两种耐RNase的披甲RNA，并已于2006年申报国家发明专利。 (1)本研究组装了耐RNase的披甲RNA，并对包含和不包含pac位点两种构建策略进行了比较，结果表明pac位点可促进披甲RNA的组装及稳定性。 (2)本研究首次报道了针对甲型、乙型流感病毒和SARS冠状病毒，制备了内含三种病毒RNA片段的复合披甲RNA，可用作多种呼吸道病毒RT-PCR检测的标准品和质控品。 (3)首次报道了将甲3型流感M基因全长RNA包裹起来制备成披甲RNA，并用作甲型流感M基因检测的标准品和质控品。 (4)同时本研究首次建立了多重实时荧光RT-PCR方法，在一个PCR反应内同时检测甲型、乙型流感病毒和SARS冠状病毒，可为临床呼吸道感染的快速诊断提供更为准确和及时的实验室数据。 (5)以研制的披甲RNA为外对照，使用建立的多重实时荧光RT-PCR方法对290份呼吸道样品（咽拭子）进行检测，敏感性和特异性良好。 披甲RNA用作RT-PCR检测的标准品和质控品，可更大程度上保证操作过程中的生物安全性，并使得RT-PCR检测标准化、程序化，对更好地监测RNA病毒性传染病具有重大意义。两种披甲RNA均已在本实验室投入使用，应用前景广阔。本研究研制的披甲RNA和建立的多重实时荧光RT-PCR方法对提高传染性病毒检测的正确率，尽早发现、控制疫情提供一定保障，具有显著的社会效益和经济效益。 本研究已与中华实验和临床病毒学杂志发表论文1篇，与J Clin Microbio（2006年影响因子3.445）发表论文1篇，申请国家发明专利1项。