一、课题的来源和背景 当前全国的结核病疫情仍很严重，各地不平衡，在2006～2007卫生部公布的27种重点传染病中，结核的发病数居第一位，死亡数居第二位，均排在SARS之前。因此，加强对结核病的防治和研究工作十分重要，刻不容缓。结核病的实验室检查是结核病的临床诊断和流行病调查的主要手段，其中细菌学检查是结核病诊断的金标准。结核的病原体是抗酸分枝杆菌，大多数分枝杆菌，生长十分缓慢。目前分枝杆菌培养药敏试验仍多采用传统方法，在传统改良罗（L-J）氏固体培养基上，要经4～8周培养才能生长出菌落，再经4周才能获得药敏结果，不能满足临床化疗的需要。我们于2003年申报南京市科技局社会发展项目“抗酸分枝杆菌的超快速药敏实验方法的研究”，历时4年，已初步完成了该课题的研究，建立了通过放大系统观察的抗酸分枝杆菌微量直视观察快速药敏方法，可用于结核病临床药敏实验测定。 二、技术原理及性能指标 我们经研究建立了分枝杆菌快速微量直视培养药敏及鉴定检测法，由无级超千倍放大系统、连续微量培养板和即时图像采集报告组成。可快速检测抗酸分枝杆菌对各种抗菌药物的敏感性，为临床治疗提供依据。操作方法简单，只要在含药的培养板上加上菌悬液，37℃培养，放大系统观察即可。 本法速度快，对282例的临床菌株测定，药敏测定时间平均5.6天，71.3﹪在5天内，90.3﹪在7天内获得结果，比目前任何一种培养药敏方法都快。方法简单，在有药的培养孔内直接加入分离的菌悬液，在鉴定系统上观察即可得出结果。结果直观：通过活体细菌直视连续超千倍放大系统，可以直接观察到细菌在药物作用下的生长状态。成本低：本法使用的活体细菌直视连续超千倍放大系统和专用微量培养板是完全用国产原材料构建和制造的，具有完全自主知识产权，微量板使用的培养基很少，因此节约了大量试剂成本。 三、技术的创造性与先进性 目前世界上结核药敏试验方法基本上可以分为两大类，一类是直接取证法：观察抗酸分枝杆菌在药物作用下菌落生长情况，判定是否耐药（改良L-J法、比例法等）；另一类是间接取证法：在药物作用下间接观察细菌生长时产生的代谢改变（O_2的消耗、CO_2的产生、PH改变、代谢产物和酶的活性等）或者基因的变异和噬菌体作用等。前一类比较直观，出现错误的几率小，但速度慢；后一种虽然速度比较快，但因为是间接观察，影响因素多，出现误差的可能性比较大。 我们研究和建立了一种兼顾以上两类方法优点，同时尽量规避它们的缺点的方法。采用我们研制的放大系统和微量培养板，直接观察细菌在药物作用下个体细菌和微菌群的生长状态，判断耐药性，从而达到快速和直观的目的。 四、技术的成熟程度，适用范围和安全性 经实验验证，本法科学可行，具有简单、快速、经济和直观的特点，属于快速的结核分枝杆菌药敏检测方法，符合WHO对寻找新药敏方法的要求，操作人员经过一周的培训即可掌握该项技术，适合在广大基层推广应用。而且适用于抗菌药物的MIC和混合药敏试验：无论是MIC或混合药敏试验，其对每一种药物都需要多个不同浓度的管或多个不同药物和浓度搭配的管，不论成本上还是在操作上，在其他快速法都不可能在临床检验中实施。本法由于使用多孔微量培养板，培养基用量很少，很容易进行倍比稀释和药物搭配混合，成本低，操作简便，因此可以实现临床意义上MIC或混合药敏试验。 使用安全，所有操作在生物安全柜进行，培养板加上菌悬液后将盖盖上，在以后观测检查时不再开盖，一直到结果报告后整体培养板高压消毒或微波消毒，减少污染。 五、应用情况及存在问题 本方法已在本院进行临床验证，申请专利。实施产品的产业化可使该方法进一步推广使用。需要资金的投入和生产厂家的参与。 六、历年的获奖情况 “分枝杆菌培养及药敏非放射性快速荧光检测法的研究”获2002年度南京市科技进步二等奖。

一、课题的来源和背景 当前全国的结核病疫情仍很严重，各地不平衡，在2006～2007卫生部公布的27种重点传染病中，结核的发病数居第一位，死亡数居第二位，均排在SARS之前。因此，加强对结核病的防治和研究工作十分重要，刻不容缓。结核病的实验室检查是结核病的临床诊断和流行病调查的主要手段，其中细菌学检查是结核病诊断的金标准。结核的病原体是抗酸分枝杆菌，大多数分枝杆菌，生长十分缓慢。目前分枝杆菌培养药敏试验仍多采用传统方法，在传统改良罗（L-J）氏固体培养基上，要经4～8周培养才能生长出菌落，再经4周才能获得药敏结果，不能满足临床化疗的需要。我们于2003年申报南京市科技局社会发展项目“抗酸分枝杆菌的超快速药敏实验方法的研究”，历时4年，已初步完成了该课题的研究，建立了通过放大系统观察的抗酸分枝杆菌微量直视观察快速药敏方法，可用于结核病临床药敏实验测定。 二、技术原理及性能指标 我们经研究建立了分枝杆菌快速微量直视培养药敏及鉴定检测法，由无级超千倍放大系统、连续微量培养板和即时图像采集报告组成。可快速检测抗酸分枝杆菌对各种抗菌药物的敏感性，为临床治疗提供依据。操作方法简单，只要在含药的培养板上加上菌悬液，37℃培养，放大系统观察即可。 本法速度快，对282例的临床菌株测定，药敏测定时间平均5.6天，71.3﹪在5天内，90.3﹪在7天内获得结果，比目前任何一种培养药敏方法都快。方法简单，在有药的培养孔内直接加入分离的菌悬液，在鉴定系统上观察即可得出结果。结果直观：通过活体细菌直视连续超千倍放大系统，可以直接观察到细菌在药物作用下的生长状态。成本低：本法使用的活体细菌直视连续超千倍放大系统和专用微量培养板是完全用国产原材料构建和制造的，具有完全自主知识产权，微量板使用的培养基很少，因此节约了大量试剂成本。 三、技术的创造性与先进性 目前世界上结核药敏试验方法基本上可以分为两大类，一类是直接取证法：观察抗酸分枝杆菌在药物作用下菌落生长情况，判定是否耐药（改良L-J法、比例法等）；另一类是间接取证法：在药物作用下间接观察细菌生长时产生的代谢改变（O_2的消耗、CO_2的产生、PH改变、代谢产物和酶的活性等）或者基因的变异和噬菌体作用等。前一类比较直观，出现错误的几率小，但速度慢；后一种虽然速度比较快，但因为是间接观察，影响因素多，出现误差的可能性比较大。 我们研究和建立了一种兼顾以上两类方法优点，同时尽量规避它们的缺点的方法。采用我们研制的放大系统和微量培养板，直接观察细菌在药物作用下个体细菌和微菌群的生长状态，判断耐药性，从而达到快速和直观的目的。 四、技术的成熟程度，适用范围和安全性 经实验验证，本法科学可行，具有简单、快速、经济和直观的特点，属于快速的结核分枝杆菌药敏检测方法，符合WHO对寻找新药敏方法的要求，操作人员经过一周的培训即可掌握该项技术，适合在广大基层推广应用。而且适用于抗菌药物的MIC和混合药敏试验：无论是MIC或混合药敏试验，其对每一种药物都需要多个不同浓度的管或多个不同药物和浓度搭配的管，不论成本上还是在操作上，在其他快速法都不可能在临床检验中实施。本法由于使用多孔微量培养板，培养基用量很少，很容易进行倍比稀释和药物搭配混合，成本低，操作简便，因此可以实现临床意义上MIC或混合药敏试验。 使用安全，所有操作在生物安全柜进行，培养板加上菌悬液后将盖盖上，在以后观测检查时不再开盖，一直到结果报告后整体培养板高压消毒或微波消毒，减少污染。 五、应用情况及存在问题 本方法已在本院进行临床验证，申请专利。实施产品的产业化可使该方法进一步推广使用。需要资金的投入和生产厂家的参与。 六、历年的获奖情况 “分枝杆菌培养及药敏非放射性快速荧光检测法的研究”获2002年度南京市科技进步二等奖。