研究建立具有高灵敏度和特异性的定量检测NT-BNP的 ELISA-双酶循环方法，在常规ELISA和荧光分析的基础上将常规ELISA的二抗用碱性磷酸酶（ALP）标记，后者将底物NADP+去磷酸化生成NAD+，NAD+在乙醇脱氢酶和黄传酶的共同作用下进入一个氧化还原循环。首先NAD+被乙醇脱氢酶还原为NADH，同时乙醇脱氢生成乙醛，其次NADH被黄传酶氧化为NAD+，并将荧光底物resazurin还原为荧光物质resorufin。随着每一次NAD+、NADH的循环，荧光产物或可见光产物亦伴随增加，其增加的幅度与NAD+的量成正比。因此通过测定荧光产物量可以反映NAD+量。在NADP+过量的条件下，NAD+的生成量与ALP的量成正比，故双酶循环方法可将ELISA中由ALP携带的信号放大。从理论上说，这一双酶循环的放大倍数只受乙醇脱氢酶底物乙醇和黄传酶底物resazurin耗竭的限制。但是ELISA-双酶底物循环的实际操作过程中，这种高效的双酶循环反应的扩增效率将受许多因素的影响。故本实验对ELISA-双酶循环每一步的影响因素进行了实验分析和研究，建立了荧光底物的ELISA-双酶循环扩增法检测NT-BNP，具有很高的灵敏度。这种双酶循环扩增法可设计串联任何ALP标记的ELISA，具有广泛的临床实用价值。

研究建立具有高灵敏度和特异性的定量检测NT-BNP的 ELISA-双酶循环方法，在常规ELISA和荧光分析的基础上将常规ELISA的二抗用碱性磷酸酶（ALP）标记，后者将底物NADP+去磷酸化生成NAD+，NAD+在乙醇脱氢酶和黄传酶的共同作用下进入一个氧化还原循环。首先NAD+被乙醇脱氢酶还原为NADH，同时乙醇脱氢生成乙醛，其次NADH被黄传酶氧化为NAD+，并将荧光底物resazurin还原为荧光物质resorufin。随着每一次NAD+、NADH的循环，荧光产物或可见光产物亦伴随增加，其增加的幅度与NAD+的量成正比。因此通过测定荧光产物量可以反映NAD+量。在NADP+过量的条件下，NAD+的生成量与ALP的量成正比，故双酶循环方法可将ELISA中由ALP携带的信号放大。从理论上说，这一双酶循环的放大倍数只受乙醇脱氢酶底物乙醇和黄传酶底物resazurin耗竭的限制。但是ELISA-双酶底物循环的实际操作过程中，这种高效的双酶循环反应的扩增效率将受许多因素的影响。故本实验对ELISA-双酶循环每一步的影响因素进行了实验分析和研究，建立了荧光底物的ELISA-双酶循环扩增法检测NT-BNP，具有很高的灵敏度。这种双酶循环扩增法可设计串联任何ALP标记的ELISA，具有广泛的临床实用价值。