关节软骨为覆盖关节面的一层光亮的低摩擦、富有弹性、高渗透性的特异化结缔组织。关节软骨是无血管、淋巴管和神经的组织，损伤后自身修复能力有限，关节软骨修复重建一直是骨科领域中棘手的问题，国内外许多学者为此进行长期的大量的研究，如磨削关节成型术、软骨下骨钻孔术、微骨折术；筋膜、骨膜、软骨膜的替代手术；自体或异体关节软骨移植术等，虽取得了可喜的成果，但由于各自应用的缺陷而不能取得广泛、长期的疗效。在本实验中，采用组织工程方法来修复兔的关节软骨缺损。 主要研究内容和方法： 1.骨髓间充质干细胞分离培养及鉴定：选用5月龄青紫蓝兔为实验动物。自髂棘处抽取骨髓，密度梯度离心法和贴壁筛选法分离、培养和扩增获得的骨髓间充质干细胞（MSCs），并对所培养细胞进行CD44、CD34细胞免疫化学鉴定。 2.移植复合物对缺损软骨的修复：对实验动物随机分为4组，实验组A组（n=20）：细胞/载体/因子复合物；对照组B组（n=20）：细胞/载体；对照组C组（n=20）：载体/因子；空白组D组（n=10）：单纯钻孔。建立关节软骨缺损动物模型后依分组将移植复合物分别植入到缺损处，12周观察关节软骨表面及HE、甲苯胺蓝染色后观察修复软骨的结构，并用半定量评分标准进行评分。免疫组织化学染色鉴定修复软骨性质。 实验结果： 1.对所培养细胞进行细胞免疫化学鉴定发现，MSCs特异性抗原CD44阳性，造血干细胞特异性抗原CD34、软骨细胞特异性标记物Ⅱ型胶原单克隆抗体均为阴性表达。 2.12周后观察到以下结果，实验组缺损由类透明软骨或透明软骨修复，Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性，甲苯胺蓝异染性明显，修复面较平整光滑；而对照组则以纤维软骨及纤维组织修复，Ⅱ型胶原免疫组化染色阴性。改良pineda法半定量组织学评分实验组总分平均为6.50，较对照组有显著性差异。 结论： 在本实验中，应用密度梯度离心法和贴壁筛选法分离、培养和扩增获得的骨髓间充质干细胞（MSCs），行CD44、CD34细胞免疫化学鉴定；将第三代的MSCs以(40～100)×10^9/L的密度与FG、小剂量TGF-β1（25μg/L）制成的混合物移植到兔关节软骨缺损处，经12w后采取标本，行大体及镜下组织学观察，并行Ⅱ型胶原的免疫组织化学检测，用半定量评分法对修复组织进行量化评价，所得数据行统计学处理，结果有透明软骨生成，效果满意。 本实验方法修复关节软骨缺损的结果证明： 1.骨髓源性的MSCs能够用于软骨组织工程学的种子细胞； 2.天然可降解水凝胶材料纤维蛋白凝胶能够用作软骨组织工程学的支架材料； 3.只有满足组织工程学合理三要素的复合移植物才能最好地修复软骨缺损。

关节软骨为覆盖关节面的一层光亮的低摩擦、富有弹性、高渗透性的特异化结缔组织。关节软骨是无血管、淋巴管和神经的组织，损伤后自身修复能力有限，关节软骨修复重建一直是骨科领域中棘手的问题，国内外许多学者为此进行长期的大量的研究，如磨削关节成型术、软骨下骨钻孔术、微骨折术；筋膜、骨膜、软骨膜的替代手术；自体或异体关节软骨移植术等，虽取得了可喜的成果，但由于各自应用的缺陷而不能取得广泛、长期的疗效。在本实验中，采用组织工程方法来修复兔的关节软骨缺损。 主要研究内容和方法： 1.骨髓间充质干细胞分离培养及鉴定：选用5月龄青紫蓝兔为实验动物。自髂棘处抽取骨髓，密度梯度离心法和贴壁筛选法分离、培养和扩增获得的骨髓间充质干细胞（MSCs），并对所培养细胞进行CD44、CD34细胞免疫化学鉴定。 2.移植复合物对缺损软骨的修复：对实验动物随机分为4组，实验组A组（n=20）：细胞/载体/因子复合物；对照组B组（n=20）：细胞/载体；对照组C组（n=20）：载体/因子；空白组D组（n=10）：单纯钻孔。建立关节软骨缺损动物模型后依分组将移植复合物分别植入到缺损处，12周观察关节软骨表面及HE、甲苯胺蓝染色后观察修复软骨的结构，并用半定量评分标准进行评分。免疫组织化学染色鉴定修复软骨性质。 实验结果： 1.对所培养细胞进行细胞免疫化学鉴定发现，MSCs特异性抗原CD44阳性，造血干细胞特异性抗原CD34、软骨细胞特异性标记物Ⅱ型胶原单克隆抗体均为阴性表达。 2.12周后观察到以下结果，实验组缺损由类透明软骨或透明软骨修复，Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性，甲苯胺蓝异染性明显，修复面较平整光滑；而对照组则以纤维软骨及纤维组织修复，Ⅱ型胶原免疫组化染色阴性。改良pineda法半定量组织学评分实验组总分平均为6.50，较对照组有显著性差异。 结论： 在本实验中，应用密度梯度离心法和贴壁筛选法分离、培养和扩增获得的骨髓间充质干细胞（MSCs），行CD44、CD34细胞免疫化学鉴定；将第三代的MSCs以(40～100)×10^9/L的密度与FG、小剂量TGF-β1（25μg/L）制成的混合物移植到兔关节软骨缺损处，经12w后采取标本，行大体及镜下组织学观察，并行Ⅱ型胶原的免疫组织化学检测，用半定量评分法对修复组织进行量化评价，所得数据行统计学处理，结果有透明软骨生成，效果满意。 本实验方法修复关节软骨缺损的结果证明： 1.骨髓源性的MSCs能够用于软骨组织工程学的种子细胞； 2.天然可降解水凝胶材料纤维蛋白凝胶能够用作软骨组织工程学的支架材料； 3.只有满足组织工程学合理三要素的复合移植物才能最好地修复软骨缺损。