一、 应用领域和技术原理 　　1、应用领域 　　本课题通过对所建方法敏感性、特异性、重复性等方面的研究，建立了一套较为成熟的基于荧光定量PCR技术的空肠弯曲菌快速检测方法，可用于食源性疾病的监测和食物中毒的快速检测。 　　2、技术原理 　　基于Taqman技术的荧光定量PCR方法的原理就是在PCR扩增时，加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针。该探针为一直线型的寡核苷酸，两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，PCR仪检测不到荧光信号；PCR扩增时（在延伸阶段），Taq酶的5|－3|外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 　　二、主要技术性能 　　1、较高的方法特异性 　　通过对标准菌株及易引起食源性疾病或食物中毒的非空肠弯曲菌菌株验证试验，显示本方法具有较高的特异性，只有空肠弯曲菌才能被特异性扩增。 　　2、较高的方法灵敏度 　　以麦氏比浊浓度约1×108cfu/mL的菌液，作梯度稀释后提取DNA作荧光定量PCR检测，结果表明荧光定量PCR法的最低检测限可达10cfu/mL。而且本方法所得标准曲线较好，相关性R2达到了0.99以上。 　　3、较好的重复性 　　本方法通过对空肠弯曲菌中不同浓度的菌悬液重复做荧光定量PCR检测，并计算Ct值的标准差的方法来检验本法的重复性，通过反复试验表明，该体系重复性好，稳定性高。 　　4、较完善的方法设计 　　本PCR方法设计严密，包含了样品处理与试验以及防止荧光定量PCR检测过程中发生污染的方法（如应用了UNG酶防污染系统，使用带滤塞加样器吸头、混匀液体时用混匀器混匀、操作前后用260nm紫外照射等）。比国内相关文献相关报道方法更完善，能够满足空肠弯曲菌快速检测的要求。 　　三、应用前景 　　本课题建立的方法既可定性检测空肠弯曲菌，也可定量检测空肠弯曲菌，可满足在对于食物中毒快速检测的要求和对于日常食源性疾病监测样品的检测要求，在检验检疫、疾病控制等领域将有广阔的应用前景。

　　一、 应用领域和技术原理 　　1、应用领域 　　本课题通过对所建方法敏感性、特异性、重复性等方面的研究，建立了一套较为成熟的基于荧光定量PCR技术的空肠弯曲菌快速检测方法，可用于食源性疾病的监测和食物中毒的快速检测。 　　2、技术原理 　　基于Taqman技术的荧光定量PCR方法的原理就是在PCR扩增时，加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针。该探针为一直线型的寡核苷酸，两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，PCR仪检测不到荧光信号；PCR扩增时（在延伸阶段），Taq酶的5|－3|外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 　　二、主要技术性能 　　1、较高的方法特异性 　　通过对标准菌株及易引起食源性疾病或食物中毒的非空肠弯曲菌菌株验证试验，显示本方法具有较高的特异性，只有空肠弯曲菌才能被特异性扩增。 　　2、较高的方法灵敏度 　　以麦氏比浊浓度约1×108cfu/mL的菌液，作梯度稀释后提取DNA作荧光定量PCR检测，结果表明荧光定量PCR法的最低检测限可达10cfu/mL。而且本方法所得标准曲线较好，相关性R2达到了0.99以上。 　　3、较好的重复性 　　本方法通过对空肠弯曲菌中不同浓度的菌悬液重复做荧光定量PCR检测，并计算Ct值的标准差的方法来检验本法的重复性，通过反复试验表明，该体系重复性好，稳定性高。 　　4、较完善的方法设计 　　本PCR方法设计严密，包含了样品处理与试验以及防止荧光定量PCR检测过程中发生污染的方法（如应用了UNG酶防污染系统，使用带滤塞加样器吸头、混匀液体时用混匀器混匀、操作前后用260nm紫外照射等）。比国内相关文献相关报道方法更完善，能够满足空肠弯曲菌快速检测的要求。 　　三、应用前景 　　本课题建立的方法既可定性检测空肠弯曲菌，也可定量检测空肠弯曲菌，可满足在对于食物中毒快速检测的要求和对于日常食源性疾病监测样品的检测要求，在检验检疫、疾病控制等领域将有广阔的应用前景。