1.课题来源： 　　自选项目。 　　2.应用领域和技术原理： 　　Taqman MGB探针是应用在实时定量PCR中进行特异PCR产物定量检测的一种荧光探针。由于HBV DNA C区BCP双突变点1762（A→T）和1764（G→A）相伴发生。为了检测双突变，我们设计的TaqmanMGB探针序列包含双突变位点，由于该探针序列与双突变（1762T和1764A）序列完全互补，能与发生双突变的序列结合，探针可以被Taqman酶切割，从而产生荧光检测信号；而与野生型序列存在两个位点的错配（1762A和1764G），不能与未发生双突变的野生型序列结合，因此无法检测到未发生双突变的序列。 　　3.性能指标： 　　用巢式PCR方法扩增血清HBV DNA目的基因片段，对标本的PCR产物进行直接测序；并对 乙肝肝硬化患者和无症状HBV携带者HBV DNA的扩增片段进行克隆，测序分析比较测序结果； 乙肝肝硬化同一患者X区不同克隆之间的碱基序列同源性为91.3﹪～99.7﹪，而HBV携带者为 96﹪～100﹪。实验证明：本研究中所设计的双突变检测探针可以正确检测双突变。其灵敏度达到3×100拷贝的标准阳性对照，并且检测结果具有良好的重复性、特异性。 　　4、与国外同类技术比较： 　　经文献检索国内外近十余年来的相关文献数据，发现乙型肝炎肝硬化X启动子区变异率显著高于 非肝硬化的HBV携带者。所检国内外文献范围内，未见相同的文献报道。 　　5、成果的创新性、先进性： 　　本文研究证实肝硬化患者HBV DNA核心启动子(CP)双突变的发生率显著高于非肝硬化的HBV携带者。同时发现肝硬化患者中，还存在G1719T、T1727G/A、G1730C、T1753C等位点的变异。　　6、建立了Taqman-MGB探针检测HBV DNA核心启动子(CP)双突变的方法。

　　1.课题来源： 　　自选项目。 　　2.应用领域和技术原理： 　　Taqman MGB探针是应用在实时定量PCR中进行特异PCR产物定量检测的一种荧光探针。由于HBV DNA C区BCP双突变点1762（A→T）和1764（G→A）相伴发生。为了检测双突变，我们设计的TaqmanMGB探针序列包含双突变位点，由于该探针序列与双突变（1762T和1764A）序列完全互补，能与发生双突变的序列结合，探针可以被Taqman酶切割，从而产生荧光检测信号；而与野生型序列存在两个位点的错配（1762A和1764G），不能与未发生双突变的野生型序列结合，因此无法检测到未发生双突变的序列。 　　3.性能指标： 　　用巢式PCR方法扩增血清HBV DNA目的基因片段，对标本的PCR产物进行直接测序；并对 乙肝肝硬化患者和无症状HBV携带者HBV DNA的扩增片段进行克隆，测序分析比较测序结果； 乙肝肝硬化同一患者X区不同克隆之间的碱基序列同源性为91.3﹪～99.7﹪，而HBV携带者为 96﹪～100﹪。实验证明：本研究中所设计的双突变检测探针可以正确检测双突变。其灵敏度达到3×100拷贝的标准阳性对照，并且检测结果具有良好的重复性、特异性。 　　4、与国外同类技术比较： 　　经文献检索国内外近十余年来的相关文献数据，发现乙型肝炎肝硬化X启动子区变异率显著高于 非肝硬化的HBV携带者。所检国内外文献范围内，未见相同的文献报道。 　　5、成果的创新性、先进性： 　　本文研究证实肝硬化患者HBV DNA核心启动子(CP)双突变的发生率显著高于非肝硬化的HBV携带者。同时发现肝硬化患者中，还存在G1719T、T1727G/A、G1730C、T1753C等位点的变异。　　6、建立了Taqman-MGB探针检测HBV DNA核心启动子(CP)双突变的方法。