在已建立的人骨膜细胞体外培养方法基础上，进一步利用成骨因子的诱导活性对体外培养的骨膜细胞进行干预，在体外进行成骨研究。采用CCK-8法检测骨膜细胞的增殖活性，显微镜下观察细胞形态学变化，ALP及钙结节染色法对骨膜细胞的成骨分化表型和相关标志物表达进行检测，实时定量PCR法，ELISA法检测骨膜细胞体外成骨分化的基因表达及其成骨特异蛋白分泌，同时应用甲苯胺蓝染色及实时定量PCR法鉴定软骨特异标志物及其特异基因表达，探讨骨膜细胞在特定成骨因子体外干预下的定向成骨分化及其途。研究证实： 1.人骨膜细胞具有良好的体外增殖和成骨能力，作为组织工程骨体外构建的种子细胞具有很大优势。 2.经BMP7诱导后的骨膜细胞符合成骨细胞的典型特征，表达成骨特异基因并合成分泌成骨特异蛋白，提示骨膜细胞已分化为成骨细胞。 3.骨膜细胞体外成骨分化与细胞因子BMP7密切相关，BMP7是促进和诱导骨膜细胞成骨分化的重要细胞因子之一。并发现BMP7在体外诱导骨膜细胞成骨分化过程中，除成骨细胞直接分化成骨外，还存在部分软骨细胞分化，并先经软骨形成再由软骨钙化成骨的现象。 4.骨膜细胞经BMP7途径可在体外获取大量成骨细胞分化成骨，并可用于组织工程骨的体外构建及临床应用。 采用骨膜细胞作为骨组织工程种子细胞具有： 1.取材方便、来源广泛且对机体无损伤作用。 2.可在体外大量培养扩增。 3.在适当因子诱导下可向成骨或软骨方向分化。 4.自体培养后移植可避免免疫排斥反应。 5.细胞增殖比成骨细胞更活跃，不受传代影响。并且骨膜细胞在体内外均具有很强的成骨、软骨分化潜能，在某种药物或细胞因子诱导下可定向分化为骨、软骨等组织。且所有年龄段人骨膜均保留有这种潜力。通过以骨膜细胞作为组织工程种子细胞的系列实验研究，运用骨膜细胞体外构建组织工程骨，必将在临床治疗骨缺损等骨科疾病发挥积极的作用。

在已建立的人骨膜细胞体外培养方法基础上，进一步利用成骨因子的诱导活性对体外培养的骨膜细胞进行干预，在体外进行成骨研究。采用CCK-8法检测骨膜细胞的增殖活性，显微镜下观察细胞形态学变化，ALP及钙结节染色法对骨膜细胞的成骨分化表型和相关标志物表达进行检测，实时定量PCR法，ELISA法检测骨膜细胞体外成骨分化的基因表达及其成骨特异蛋白分泌，同时应用甲苯胺蓝染色及实时定量PCR法鉴定软骨特异标志物及其特异基因表达，探讨骨膜细胞在特定成骨因子体外干预下的定向成骨分化及其途。研究证实： 1.人骨膜细胞具有良好的体外增殖和成骨能力，作为组织工程骨体外构建的种子细胞具有很大优势。 2.经BMP7诱导后的骨膜细胞符合成骨细胞的典型特征，表达成骨特异基因并合成分泌成骨特异蛋白，提示骨膜细胞已分化为成骨细胞。 3.骨膜细胞体外成骨分化与细胞因子BMP7密切相关，BMP7是促进和诱导骨膜细胞成骨分化的重要细胞因子之一。并发现BMP7在体外诱导骨膜细胞成骨分化过程中，除成骨细胞直接分化成骨外，还存在部分软骨细胞分化，并先经软骨形成再由软骨钙化成骨的现象。 4.骨膜细胞经BMP7途径可在体外获取大量成骨细胞分化成骨，并可用于组织工程骨的体外构建及临床应用。 采用骨膜细胞作为骨组织工程种子细胞具有： 1.取材方便、来源广泛且对机体无损伤作用。 2.可在体外大量培养扩增。 3.在适当因子诱导下可向成骨或软骨方向分化。 4.自体培养后移植可避免免疫排斥反应。 5.细胞增殖比成骨细胞更活跃，不受传代影响。并且骨膜细胞在体内外均具有很强的成骨、软骨分化潜能，在某种药物或细胞因子诱导下可定向分化为骨、软骨等组织。且所有年龄段人骨膜均保留有这种潜力。通过以骨膜细胞作为组织工程种子细胞的系列实验研究，运用骨膜细胞体外构建组织工程骨，必将在临床治疗骨缺损等骨科疾病发挥积极的作用。