本课题以分子流行病学、生态学、分子进化等学科的理论及技术方法为基础，结合血清学方法和现场流行病学调查，研究沈阳市不同生态地理条件下啮齿类动物的种类、密度，不同种类动物携带汉坦病毒的型及其遗传特征及其流行强度，丰富了我市汉坦病毒的遗传多样性数据库，研究上述特征与我市近年来不同地区HFRS流行规律，疫情演变之间的关系；对HFRS的流行病学的追踪、溯源提高到分子水平，可及时发现新的汉坦病毒型别或亚型及其流行的动态变化。 项目实施的方法如下：1.应用免疫荧光法（IFA）对血清标本进行汉坦病毒的IgM和IgG抗体检测，间接免疫荧光法检测鼠肺标本病毒抗原。2.应用TRIzol提取抗体阳性的患者血清标本及病毒抗原阳性的鼠肺组织总RNA，用RT-PCR法检测汉坦病毒的部分S片段，对全部获得的序列进行克隆后测序。3.应用DNAStar、Clustalx、Phylip、Tree view等序列分析软件将测得的基因序列同互联网上美国NCBI基因数据库录入的部分序列进行序列分析和同源性的比较，建立种系发生树。 我们与中国疾病预防控制中心传染病预防控制所一起研究发现我市东方田鼠中存在符拉迪沃斯托克病毒（Vladivostok virus，VLAV）（注：该研究结果已发表在2008年SCI收录的期刊-“病毒研究”上），该病毒不同于以往发现的VLAV，为一新亚型。 在2007年11月—2009年12月期间对06年沈阳某大学出现实验室感染的情况进行了全方位深入的调查，我们收集了大量的标本，通过对患者血清、感染的实验动物、实验动物中心周围的褐家鼠、学校附近郊区HFRS高发区流行的野外鼠进行检测，对检测出血清HV抗体阳性和鼠肺组织抗原阳性的标本进行病毒分离及核苷酸序列的分析，并进行了种系发生树的构建。我们共收集8名患者的血清样品，用IFA法检测SEOV和HTNV的IgM和IgG抗体，所有血清抗体的结果显示，SEOV的IgM和IgG的滴度都有所升高。8份血清中有6份的SEOV的IgG滴度呈4倍增高，2份血清SEOV的IgG滴度呈2倍增高。在6名患者和26个实验鼠中扩增的所有部分S片段序列经过分析均属于SEOV型；在该大学实验动物中心附近的HFRS高发区共捕获了156个褐家鼠，用IFA法检测出4份病毒抗原阳性，经过RT-PCR扩增出部分S片段序列，将它们与患者和实验鼠中扩增的S片段比较分析表明，它们彼此有很高的碱基同源性，并在种系发生树上处于同一分支，这些结果确认了沈阳暴发的HFRS是由SEOV导致的，表明感染途径是从野外鼠→实验鼠→人。经HV基因序列分析和血清学试验表明，这次暴发是由本地野外褐家鼠携带SEOV变种通过实验大鼠传播给人类所致。 该项目为研究汉坦病毒的分子遗传特征和病毒演变奠定基础，通过在沈阳地区人感染汉坦病毒的型别判定及可能发现新的汉坦病毒基因型研究对防控HFRS有很大的社会效益，对城市地区出血热流行规律，疫情演变以及预防控制都具有重要的意义。在出血热疫情处理中可及时准确地追溯病毒来源，为控制疫情继续蔓延提供科学保障。

本课题以分子流行病学、生态学、分子进化等学科的理论及技术方法为基础，结合血清学方法和现场流行病学调查，研究沈阳市不同生态地理条件下啮齿类动物的种类、密度，不同种类动物携带汉坦病毒的型及其遗传特征及其流行强度，丰富了我市汉坦病毒的遗传多样性数据库，研究上述特征与我市近年来不同地区HFRS流行规律，疫情演变之间的关系；对HFRS的流行病学的追踪、溯源提高到分子水平，可及时发现新的汉坦病毒型别或亚型及其流行的动态变化。 项目实施的方法如下：1.应用免疫荧光法（IFA）对血清标本进行汉坦病毒的IgM和IgG抗体检测，间接免疫荧光法检测鼠肺标本病毒抗原。2.应用TRIzol提取抗体阳性的患者血清标本及病毒抗原阳性的鼠肺组织总RNA，用RT-PCR法检测汉坦病毒的部分S片段，对全部获得的序列进行克隆后测序。3.应用DNAStar、Clustalx、Phylip、Tree view等序列分析软件将测得的基因序列同互联网上美国NCBI基因数据库录入的部分序列进行序列分析和同源性的比较，建立种系发生树。 我们与中国疾病预防控制中心传染病预防控制所一起研究发现我市东方田鼠中存在符拉迪沃斯托克病毒（Vladivostok virus，VLAV）（注：该研究结果已发表在2008年SCI收录的期刊-“病毒研究”上），该病毒不同于以往发现的VLAV，为一新亚型。 在2007年11月—2009年12月期间对06年沈阳某大学出现实验室感染的情况进行了全方位深入的调查，我们收集了大量的标本，通过对患者血清、感染的实验动物、实验动物中心周围的褐家鼠、学校附近郊区HFRS高发区流行的野外鼠进行检测，对检测出血清HV抗体阳性和鼠肺组织抗原阳性的标本进行病毒分离及核苷酸序列的分析，并进行了种系发生树的构建。我们共收集8名患者的血清样品，用IFA法检测SEOV和HTNV的IgM和IgG抗体，所有血清抗体的结果显示，SEOV的IgM和IgG的滴度都有所升高。8份血清中有6份的SEOV的IgG滴度呈4倍增高，2份血清SEOV的IgG滴度呈2倍增高。在6名患者和26个实验鼠中扩增的所有部分S片段序列经过分析均属于SEOV型；在该大学实验动物中心附近的HFRS高发区共捕获了156个褐家鼠，用IFA法检测出4份病毒抗原阳性，经过RT-PCR扩增出部分S片段序列，将它们与患者和实验鼠中扩增的S片段比较分析表明，它们彼此有很高的碱基同源性，并在种系发生树上处于同一分支，这些结果确认了沈阳暴发的HFRS是由SEOV导致的，表明感染途径是从野外鼠→实验鼠→人。经HV基因序列分析和血清学试验表明，这次暴发是由本地野外褐家鼠携带SEOV变种通过实验大鼠传播给人类所致。 该项目为研究汉坦病毒的分子遗传特征和病毒演变奠定基础，通过在沈阳地区人感染汉坦病毒的型别判定及可能发现新的汉坦病毒基因型研究对防控HFRS有很大的社会效益，对城市地区出血热流行规律，疫情演变以及预防控制都具有重要的意义。在出血热疫情处理中可及时准确地追溯病毒来源，为控制疫情继续蔓延提供科学保障。