1.任务来源 “转染VEGF基因组织工程皮肤的构建和移植应用研究”系2005年吉林省科技发展计划项目（合同编号：20050401-2） 2.应用领域和技术原理 应用领域：医学生物工程学研究领域。 技术原理：体外将VEGF-165基因转染至兔成纤维细胞，应用该成纤维细胞和角质形成细胞为种子细胞，结合壳多糖支架材料，构建转染外源基因的复层组织工程皮肤，以未转染外源基因的组织工程皮肤为对照，观察转基因复层组织工程皮肤和组织结构和代谢功能，进一步地应用该转基因组织工程皮肤进行动物皮肤缺损的修复实验，考察修复效果。 3.性能指标 1）探索了种子细胞分离、培养方法：分析比较了滋养层法、含血清培养法和无血清培养法及几种因子对角质形成细胞（Kc）增殖的影响。结果表明，一定浓度的Ca2+（12.5～25mg/L）、牛脑垂体提取物（BPE）（50mg/L～100mg/L）、表皮细胞生长因子（EGF）（5～10ug/L）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）（1～2 ug/L）对Kc和真皮成纤维细胞（Fb）的增殖均有促进作用。 2）成功地将外源VEGF-165基因转染到真皮Fb和表皮Kc并能够稳定表达时间为8天，转染后24h Fb即有较高水平的VEGF表达，随后于48h、72h逐步下降。转染后及筛选后Fb均有VEGF mRNA表达，生长特性未见明显改变。 3）制备了适合构建组织工程皮肤的细胞外基质网架：分别以鼠尾胶原和壳多糖为基本材料构建了三维多孔的细胞外基质网架材料，并进一步地应用其构建了具有表皮和真皮双层结构的组织工程皮肤。 4）构建的转染VEGF-165基因的复层组织工程皮肤检测到VEGFmRNA阳性表达、原位杂交检测呈阳性；Fb核呈椭圆形，能够明显观察到核仁和胞质内的粗面内质网、线粒体等细胞器，并具有分泌细胞外基质的功能；表皮层在光镜及电镜下均可观察到基底层、颗粒层、棘细胞层、透明层、角质层5个层。 5）应用该转VEGF-165基因的复层组织工程皮肤对皮肤缺损动物（兔）的移植修复效果要明显好于未VEGF-165基因的复层组织工程皮肤，愈合时间较对照组缩短达20%，修复面积为16cm2，瘢痕面积较对照组减少达50%。 4.成果的创造性、先进性 本研究通过将两个前沿领域—组织工程学和基因治疗技术相结合，构建成功可表达活性VEGF的转基因组织工程皮肤，用于皮肤缺损的移植治疗，利用移植物分泌促进创面愈合的生长因子，探索了移植物与创面整合的自行调控方法。国内外文献尚罕见相关报道。

1.任务来源 “转染VEGF基因组织工程皮肤的构建和移植应用研究”系2005年吉林省科技发展计划项目（合同编号：20050401-2） 2.应用领域和技术原理 应用领域：医学生物工程学研究领域。 技术原理：体外将VEGF-165基因转染至兔成纤维细胞，应用该成纤维细胞和角质形成细胞为种子细胞，结合壳多糖支架材料，构建转染外源基因的复层组织工程皮肤，以未转染外源基因的组织工程皮肤为对照，观察转基因复层组织工程皮肤和组织结构和代谢功能，进一步地应用该转基因组织工程皮肤进行动物皮肤缺损的修复实验，考察修复效果。 3.性能指标 1）探索了种子细胞分离、培养方法：分析比较了滋养层法、含血清培养法和无血清培养法及几种因子对角质形成细胞（Kc）增殖的影响。结果表明，一定浓度的Ca2+（12.5～25mg/L）、牛脑垂体提取物（BPE）（50mg/L～100mg/L）、表皮细胞生长因子（EGF）（5～10ug/L）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）（1～2 ug/L）对Kc和真皮成纤维细胞（Fb）的增殖均有促进作用。 2）成功地将外源VEGF-165基因转染到真皮Fb和表皮Kc并能够稳定表达时间为8天，转染后24h Fb即有较高水平的VEGF表达，随后于48h、72h逐步下降。转染后及筛选后Fb均有VEGF mRNA表达，生长特性未见明显改变。 3）制备了适合构建组织工程皮肤的细胞外基质网架：分别以鼠尾胶原和壳多糖为基本材料构建了三维多孔的细胞外基质网架材料，并进一步地应用其构建了具有表皮和真皮双层结构的组织工程皮肤。 4）构建的转染VEGF-165基因的复层组织工程皮肤检测到VEGFmRNA阳性表达、原位杂交检测呈阳性；Fb核呈椭圆形，能够明显观察到核仁和胞质内的粗面内质网、线粒体等细胞器，并具有分泌细胞外基质的功能；表皮层在光镜及电镜下均可观察到基底层、颗粒层、棘细胞层、透明层、角质层5个层。 5）应用该转VEGF-165基因的复层组织工程皮肤对皮肤缺损动物（兔）的移植修复效果要明显好于未VEGF-165基因的复层组织工程皮肤，愈合时间较对照组缩短达20%，修复面积为16cm2，瘢痕面积较对照组减少达50%。 4.成果的创造性、先进性 本研究通过将两个前沿领域—组织工程学和基因治疗技术相结合，构建成功可表达活性VEGF的转基因组织工程皮肤，用于皮肤缺损的移植治疗，利用移植物分泌促进创面愈合的生长因子，探索了移植物与创面整合的自行调控方法。国内外文献尚罕见相关报道。