一、任务来源 《单克隆抗体SPA花环法检测T细胞亚群阳性对照试剂研制》是甘肃省科技厅2004年省科学事业费批准立项资助项目，编号：QS 041-C33-30。资助经费3万元。 二、应用领域和技术原理 单克隆抗体SPA花环法检测T细胞亚群阳性对照试剂是用于实用McAb-A-E花环（实用单克隆抗体SPA红细胞花环）法或者流式细胞仪法检验人外周血细胞免疫功能T细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19、CD56等）设置阳性对照试验或者质控实验的关键试剂（或质控品），是细胞免疫功能检验建立实验室质量控制标准的物质基础。可广泛用于各级医院医学临床实验室和医学研究机构，对疾病诊断和预防保健提供科学依据有重要价值。 McAb-A-E法的原理是用氯化铬处理醛化绵羊红细胞使与金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)结合，再利用SPA能与抗体Fc段结合的特性，分别制成经抗CD3、抗CD4、抗CD8 McAb致敏的红细胞。在与淋巴细胞反应时，此致敏红细胞上的McAb即可与淋巴细胞上的CD3、CD4和CD8结合，在淋巴细胞周围形成红细胞花环。染色后在高倍镜下计数花环阳性细胞百分率，从而判定细胞免疫功能和免疫状态。 三、性能指标 SPA花环法以其快速、简便、稳定、价廉、不用昂贵的仪器、结果容易判读，而在临床检验T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)普遍应用。但因阳性对照要使用正常人活淋巴细胞因而在实际工作中受到限制。本研究用能保存抗原活性的固定剂固定淋巴细胞个体使其失活，并加入抗原保护剂经过低温冷冻干燥，来替代活的淋巴细胞作为阳性对照试剂（或者质控品）并可长期保存，从而可在SPA红细胞花环法中设置阳性对照试验或者质控，对其方法进行实验室质量控制，提高该法的可靠性和准确性，使其更加完善、稳定，临床应用更加普及。 研究结果显示，单克隆抗体SPA红细胞花环法（直接法）检验冻干淋巴细胞表面抗原活性值为CD3为65～54%，CD4为46～33%，CD8为35～27%，CD4/CD8为1.64～1.03:1，并经过流式细胞仪法初步验证，达到单克隆抗体SPA花环法的正常参考范围（正常人外周血单个核细胞测定值CD3:66.0±9.8%、CD4:43.8±9.0%、CD8:31.3±7.0%、CD4/CD8，男：1.40±0.48、女：1.59±0.43）均数值减去两个标准差，即CD3+ 46.4～66.0%，CD4+ 25.8～43.8%、CD8+ 17.3～31.3%、CD4+/CD8+ 1～2:1的预期指标。 四、与国内外同类技术比较 国外有淋巴细胞单克隆抗体公司流式细胞术应用的液态状计数淋巴细胞亚群的全血质控品。国内2005年有液态流式细胞术计数淋巴细胞亚群的全血质控品研究的报道外，在细胞免疫试验质量控制试剂研究上未见取得新进展的其他相关报道。 五、成果的创造性、先进性 1.本研究用能保存抗原活性的固定剂固定淋巴细胞个体使其失活，并加入抗原保护剂经过低温冷冻干燥，来替代活的淋巴细胞作为阳性对照试剂（或者质控品）并可长期保存，从而可在SPA红细胞花环法中设置阳性对照试验（或质控实验），对其方法进行实验室质量控制。 2.筛选了能够较好保存淋巴细胞抗原活性和细胞形态的固定剂、稀释剂、抗原保存剂、固定方法和固定条件。 3.制备了纯淋巴细胞表面抗原（CD3+、CD4+、CD8+、CD16+56等）的实验室预试冻干质控品（或阳性对照试剂），建立了制备工艺步骤和方法。 4.研究建立了SPA花环法检验T淋巴细胞亚群的实用McAb-A-E直接法和实用McAb-A-E间接法。（此项已经被省科技厅2010年甘肃省自然科学基金批准立项资助，成果另行鉴定） 六、作用意义 《单克隆抗体SPA花环法检测T细胞亚群阳性对照试剂研制》课题取得了预期的成果，已申报发明专利2项。淋巴细胞表面抗原阳性对照试剂已在实验室成功制备，得到初步应用并取得一定的经济效益和社会效益。待进一步深入研究完善后，可申报新生物制品证书。经过国家卫生部主管质量控制工作的相关部门对其认可并与标准化，可向使用SPA花环法的单位和实验室推广，从而进行室间和室内质控，保证SPA花环法检测T细胞亚群结果的可靠性和可比性。同时，淋巴细胞表面抗原阳性对照试剂（实验室预试品）已初步研究作为流式细胞仪法检验T淋巴细胞亚群的质控品，其效果优于用于SPA花环法。经主管部门检定合格后，可作为流式细胞仪细胞免疫的质量控制试剂进行推广。因此，该研究在细胞免疫检测中有很大的社会需求和广阔的临床应用前景。

一、任务来源 《单克隆抗体SPA花环法检测T细胞亚群阳性对照试剂研制》是甘肃省科技厅2004年省科学事业费批准立项资助项目，编号：QS 041-C33-30。资助经费3万元。 二、应用领域和技术原理 单克隆抗体SPA花环法检测T细胞亚群阳性对照试剂是用于实用McAb-A-E花环（实用单克隆抗体SPA红细胞花环）法或者流式细胞仪法检验人外周血细胞免疫功能T细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19、CD56等）设置阳性对照试验或者质控实验的关键试剂（或质控品），是细胞免疫功能检验建立实验室质量控制标准的物质基础。可广泛用于各级医院医学临床实验室和医学研究机构，对疾病诊断和预防保健提供科学依据有重要价值。 McAb-A-E法的原理是用氯化铬处理醛化绵羊红细胞使与金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)结合，再利用SPA能与抗体Fc段结合的特性，分别制成经抗CD3、抗CD4、抗CD8 McAb致敏的红细胞。在与淋巴细胞反应时，此致敏红细胞上的McAb即可与淋巴细胞上的CD3、CD4和CD8结合，在淋巴细胞周围形成红细胞花环。染色后在高倍镜下计数花环阳性细胞百分率，从而判定细胞免疫功能和免疫状态。 三、性能指标 SPA花环法以其快速、简便、稳定、价廉、不用昂贵的仪器、结果容易判读，而在临床检验T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)普遍应用。但因阳性对照要使用正常人活淋巴细胞因而在实际工作中受到限制。本研究用能保存抗原活性的固定剂固定淋巴细胞个体使其失活，并加入抗原保护剂经过低温冷冻干燥，来替代活的淋巴细胞作为阳性对照试剂（或者质控品）并可长期保存，从而可在SPA红细胞花环法中设置阳性对照试验或者质控，对其方法进行实验室质量控制，提高该法的可靠性和准确性，使其更加完善、稳定，临床应用更加普及。 研究结果显示，单克隆抗体SPA红细胞花环法（直接法）检验冻干淋巴细胞表面抗原活性值为CD3为65～54%，CD4为46～33%，CD8为35～27%，CD4/CD8为1.64～1.03:1，并经过流式细胞仪法初步验证，达到单克隆抗体SPA花环法的正常参考范围（正常人外周血单个核细胞测定值CD3:66.0±9.8%、CD4:43.8±9.0%、CD8:31.3±7.0%、CD4/CD8，男：1.40±0.48、女：1.59±0.43）均数值减去两个标准差，即CD3+ 46.4～66.0%，CD4+ 25.8～43.8%、CD8+ 17.3～31.3%、CD4+/CD8+ 1～2:1的预期指标。 四、与国内外同类技术比较 国外有淋巴细胞单克隆抗体公司流式细胞术应用的液态状计数淋巴细胞亚群的全血质控品。国内2005年有液态流式细胞术计数淋巴细胞亚群的全血质控品研究的报道外，在细胞免疫试验质量控制试剂研究上未见取得新进展的其他相关报道。 五、成果的创造性、先进性 1.本研究用能保存抗原活性的固定剂固定淋巴细胞个体使其失活，并加入抗原保护剂经过低温冷冻干燥，来替代活的淋巴细胞作为阳性对照试剂（或者质控品）并可长期保存，从而可在SPA红细胞花环法中设置阳性对照试验（或质控实验），对其方法进行实验室质量控制。 2.筛选了能够较好保存淋巴细胞抗原活性和细胞形态的固定剂、稀释剂、抗原保存剂、固定方法和固定条件。 3.制备了纯淋巴细胞表面抗原（CD3+、CD4+、CD8+、CD16+56等）的实验室预试冻干质控品（或阳性对照试剂），建立了制备工艺步骤和方法。 4.研究建立了SPA花环法检验T淋巴细胞亚群的实用McAb-A-E直接法和实用McAb-A-E间接法。（此项已经被省科技厅2010年甘肃省自然科学基金批准立项资助，成果另行鉴定） 六、作用意义 《单克隆抗体SPA花环法检测T细胞亚群阳性对照试剂研制》课题取得了预期的成果，已申报发明专利2项。淋巴细胞表面抗原阳性对照试剂已在实验室成功制备，得到初步应用并取得一定的经济效益和社会效益。待进一步深入研究完善后，可申报新生物制品证书。经过国家卫生部主管质量控制工作的相关部门对其认可并与标准化，可向使用SPA花环法的单位和实验室推广，从而进行室间和室内质控，保证SPA花环法检测T细胞亚群结果的可靠性和可比性。同时，淋巴细胞表面抗原阳性对照试剂（实验室预试品）已初步研究作为流式细胞仪法检验T淋巴细胞亚群的质控品，其效果优于用于SPA花环法。经主管部门检定合格后，可作为流式细胞仪细胞免疫的质量控制试剂进行推广。因此，该研究在细胞免疫检测中有很大的社会需求和广阔的临床应用前景。