一、任务来源 甘肃省医学科学研究院自选课题。 二、应用领域和技术原理 改良McAb-A-E花环（改良单克隆抗体SPA红细胞花环）法是检验人外周血细胞免疫功能T细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+等）的方法，为疾病诊断和预防保健提供细胞免疫功能科学依据，广泛用于各级医院医学临床实验室和医学研究机构。McAb-A-E法的原理是用氯化铬处理醛化绵羊红细胞使与金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)结合，再利用SPA能与抗体Fc段结合的特性，分别制成经抗CD3、抗CD4、抗CD8 McAb致敏的红细胞。在与淋巴细胞反应时，此致敏红细胞上的McAb即可与淋巴细胞上的CD3、CD4和CD8结合，在淋巴细胞周围形成红细胞花环。染色后在高倍镜下计数花环阳性细胞百分率，从而判定细胞免疫功能和免疫状态。 三、性能指标 研究分析改良McAb-A-E（改良单克隆抗体SPA红细胞花环法）直接法检验T淋巴细胞亚群细胞涂片细胞计数随机误差目的。随机选取20例标本的细胞涂片，在涂片的2/6～4/6区域间至少2区计数200个细胞，计数区域不重复，计数CD4和CD8连续4次，CD3计数2次，数据先后按计数次序随机排序。结果：20例标本对CD4和CD8连续4次的计数结果，用SPSS13.0统计软件进行描述性统计学分析，其标准差(SD)均值分别为：CD3:2.44、CD4:2.93、CD8:2.72、CD4/CD8:0.10。变异系数均值为CD3:3.15%、CD4:8.92%、CD8:6.62%、CD4/CD8:11.87%，明显小于生物学规范±10%标准（CD4/CD8除外），也明显小于原方法可允许误差限度：CD3:7.4%、CD4:10.3%、CD8:11.2%、CD4/CD8:15.3%。 四、与国内外同类技术比较 研究明确了改良McAb-A-E直接法在规定的区域内，随机细胞计数的标准差、变异系数，并与国际生物学（血液学）规范规定的±10%最大允许误差、McAb-A-E直接法原方法的可允许误差限度（变异系数）进行了比较，并给与初步方法学评价。说明改良McAb-A-E直接法细胞计数的方法明显优于原方法，符合国际生物学（血液学）规范，直接或间接提高了检验T淋巴细胞亚群方法的稳定性和准确性。 五、成果的创造性、先进性 1.研究了改良McAb-A-E直接法检验T淋巴细胞亚群细胞计数随机误差，计算出了该方法细胞计数的标准差，为该法的应用者和研究者提供方法学允许误差范围参考及方法评价提供科学依据。 2.计算改良McAb-A-E直接法检验T淋巴细胞亚群细胞计数的变异系数，并与McAb-A-E直接法原方法的可允许误差限度进行比较，了解二者随机误差的差异，进一步阐明改良McAb-A-E直接法误差范围。 3.以国际上（美国联邦登记2,28,1992;57(40):7002-186）生物学质量规范（血液学）要求标准，对改良McAb-A-E直接法进行初步方法学误差评价。 4.此研究是改良McAb-A-E直接法[1-2]新技术新方法研究（申报相关专利2项，其中1项已经授予发明专利权。该项目已被2010年甘肃省自然科学研究基金计划批准立项，成果另行鉴定）的前期基础研究。 六、作用意义 《改良McAb-A-E直接法细胞计数误差研究》课题取得了预期的成果。通过此次较为深入细致的细胞计数误差研究，明确了改良McAb-A-E直接法在检验T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+中细胞涂片细胞计数的随机误差和标准差，为研究建立SPA花环法检验T淋巴细胞亚群的改良McAb-A-E直接法打下了前期研究基础，也为将来改良McAb-A-E直接法实验室应用者和研究者提供方法学评价和误差参考。实验证明：改良McAb-A-E直接法的细胞计数误差小于原方法的计数误差，对提高实验室T淋巴细胞亚群检验的精密度和准确性有重要临床指导意义。

一、任务来源 甘肃省医学科学研究院自选课题。 二、应用领域和技术原理 改良McAb-A-E花环（改良单克隆抗体SPA红细胞花环）法是检验人外周血细胞免疫功能T细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+等）的方法，为疾病诊断和预防保健提供细胞免疫功能科学依据，广泛用于各级医院医学临床实验室和医学研究机构。McAb-A-E法的原理是用氯化铬处理醛化绵羊红细胞使与金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)结合，再利用SPA能与抗体Fc段结合的特性，分别制成经抗CD3、抗CD4、抗CD8 McAb致敏的红细胞。在与淋巴细胞反应时，此致敏红细胞上的McAb即可与淋巴细胞上的CD3、CD4和CD8结合，在淋巴细胞周围形成红细胞花环。染色后在高倍镜下计数花环阳性细胞百分率，从而判定细胞免疫功能和免疫状态。 三、性能指标 研究分析改良McAb-A-E（改良单克隆抗体SPA红细胞花环法）直接法检验T淋巴细胞亚群细胞涂片细胞计数随机误差目的。随机选取20例标本的细胞涂片，在涂片的2/6～4/6区域间至少2区计数200个细胞，计数区域不重复，计数CD4和CD8连续4次，CD3计数2次，数据先后按计数次序随机排序。结果：20例标本对CD4和CD8连续4次的计数结果，用SPSS13.0统计软件进行描述性统计学分析，其标准差(SD)均值分别为：CD3:2.44、CD4:2.93、CD8:2.72、CD4/CD8:0.10。变异系数均值为CD3:3.15%、CD4:8.92%、CD8:6.62%、CD4/CD8:11.87%，明显小于生物学规范±10%标准（CD4/CD8除外），也明显小于原方法可允许误差限度：CD3:7.4%、CD4:10.3%、CD8:11.2%、CD4/CD8:15.3%。 四、与国内外同类技术比较 研究明确了改良McAb-A-E直接法在规定的区域内，随机细胞计数的标准差、变异系数，并与国际生物学（血液学）规范规定的±10%最大允许误差、McAb-A-E直接法原方法的可允许误差限度（变异系数）进行了比较，并给与初步方法学评价。说明改良McAb-A-E直接法细胞计数的方法明显优于原方法，符合国际生物学（血液学）规范，直接或间接提高了检验T淋巴细胞亚群方法的稳定性和准确性。 五、成果的创造性、先进性 1.研究了改良McAb-A-E直接法检验T淋巴细胞亚群细胞计数随机误差，计算出了该方法细胞计数的标准差，为该法的应用者和研究者提供方法学允许误差范围参考及方法评价提供科学依据。 2.计算改良McAb-A-E直接法检验T淋巴细胞亚群细胞计数的变异系数，并与McAb-A-E直接法原方法的可允许误差限度进行比较，了解二者随机误差的差异，进一步阐明改良McAb-A-E直接法误差范围。 3.以国际上（美国联邦登记2,28,1992;57(40):7002-186）生物学质量规范（血液学）要求标准，对改良McAb-A-E直接法进行初步方法学误差评价。 4.此研究是改良McAb-A-E直接法[1-2]新技术新方法研究（申报相关专利2项，其中1项已经授予发明专利权。该项目已被2010年甘肃省自然科学研究基金计划批准立项，成果另行鉴定）的前期基础研究。 六、作用意义 《改良McAb-A-E直接法细胞计数误差研究》课题取得了预期的成果。通过此次较为深入细致的细胞计数误差研究，明确了改良McAb-A-E直接法在检验T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+中细胞涂片细胞计数的随机误差和标准差，为研究建立SPA花环法检验T淋巴细胞亚群的改良McAb-A-E直接法打下了前期研究基础，也为将来改良McAb-A-E直接法实验室应用者和研究者提供方法学评价和误差参考。实验证明：改良McAb-A-E直接法的细胞计数误差小于原方法的计数误差，对提高实验室T淋巴细胞亚群检验的精密度和准确性有重要临床指导意义。