1.课题来源与背景：该项目为兰州市人才专项资金优秀科研项目，资助经费2万元人民币。另外，由兰州市第二人民医院自筹资金3.62万元，于2010年8月底完成。 2.技术原理级性能指标： 技术原理：A.本研究采用聚合酶链式反应(PCR)结合Taqman荧光探针技术对甘肃地区532例HBV感染者进行了基因分型。TaqMan探针荧光PCR技术，采用聚合酶链式反应(PCR)结合Taqman荧光探针技术，并在探针上标记上荧光染料分子基团，在PCR反应过程中利用荧光染料在光刺激下释放的荧光能量的变化直接反映出PCR扩增产物量的变化，荧光信号变量与扩增产物变量成正比，并通过足够灵敏的自动化仪器实现对荧光的采集和分析以达到对原始模板检测的目的，实现了PCR反应的实时监测，扩增反应结束即可分析获知检测结果，省却了通过电泳来检测反应产物的步骤。该方法特异性强，灵敏度高，结果准确直观，操作简单安全，经济实用。B.通过对HBV基因分型，了解甘肃地区乙型肝炎病毒基因型分布特征，探讨其与慢性HBV感染者的性别和年龄、不同临床疾病谱、病毒复制水平及肝功能等的关系。 性能指标： (1)完成了532例HBV感染者的基因分型，确定了甘肃地区乙型肝炎病毒基因型分布特征。研究结果表明：甘肃地区的乙肝病毒基因型主要为B、C和B/C混合型，C型为优势基因型。 (2)完成了HBV基因型与慢性HBV感染者的性别和年龄、不同临床疾病谱、病毒复制水平及肝功能等相关性的分析。研究结果基显示：甘肃地区基因型分布与性别有关，B和C基因型两组的性别差异有统计学意义。基因型分布与年龄无关，C基因型感染者比B基因型感染者平均年龄偏大，但无统计学意义；B、C基因型与临床疾病谱、血清生化指标(ALT、AST、TBIL、ALB)、HBeAg状态和DNA定量之间有一定的相关性。 3.技术的创造性与先进性： (1)我们应用PCR荧光法对甘肃地区慢性HBV感染者血清中HBV DNA进行基因分型测定，并对其基因分布特点进行了分析，首次系统地探讨了甘肃地区HBV基因型与感染者年龄与性别、不同临床疾病谱、病毒复制水平及与肝功能的关系。 (2)首次发现甘肃地区HBV基因型的分布可能与性别有关，而与年龄无关。 4.技术的成熟程度，适用范围和安全性： 本研究采用PCR荧光法检测慢性HBV患者HBV基因型，能快速对乙型肝炎病毒B基因型、C基因型以及B/C混合基因型进行检测，特异性和敏感性高，结果准确直观，操作简单安全，经济实用，可大规模地进行HBV基因型分析，适合基层医院开展且将为乙肝病毒变异的研究、发病机制的探讨、病情评估、治疗药物的选择和预后判定以及分子流行病学研究提供了有力工具。 5.应用情况及存在的问题： ①基因型与临床致病性的关系应扩大样本进一步研究。②该基因分型方法在B、C、D以外基因型的分型上受到限制。

1.课题来源与背景：该项目为兰州市人才专项资金优秀科研项目，资助经费2万元人民币。另外，由兰州市第二人民医院自筹资金3.62万元，于2010年8月底完成。 2.技术原理级性能指标： 技术原理：A.本研究采用聚合酶链式反应(PCR)结合Taqman荧光探针技术对甘肃地区532例HBV感染者进行了基因分型。TaqMan探针荧光PCR技术，采用聚合酶链式反应(PCR)结合Taqman荧光探针技术，并在探针上标记上荧光染料分子基团，在PCR反应过程中利用荧光染料在光刺激下释放的荧光能量的变化直接反映出PCR扩增产物量的变化，荧光信号变量与扩增产物变量成正比，并通过足够灵敏的自动化仪器实现对荧光的采集和分析以达到对原始模板检测的目的，实现了PCR反应的实时监测，扩增反应结束即可分析获知检测结果，省却了通过电泳来检测反应产物的步骤。该方法特异性强，灵敏度高，结果准确直观，操作简单安全，经济实用。B.通过对HBV基因分型，了解甘肃地区乙型肝炎病毒基因型分布特征，探讨其与慢性HBV感染者的性别和年龄、不同临床疾病谱、病毒复制水平及肝功能等的关系。 性能指标： (1)完成了532例HBV感染者的基因分型，确定了甘肃地区乙型肝炎病毒基因型分布特征。研究结果表明：甘肃地区的乙肝病毒基因型主要为B、C和B/C混合型，C型为优势基因型。 (2)完成了HBV基因型与慢性HBV感染者的性别和年龄、不同临床疾病谱、病毒复制水平及肝功能等相关性的分析。研究结果基显示：甘肃地区基因型分布与性别有关，B和C基因型两组的性别差异有统计学意义。基因型分布与年龄无关，C基因型感染者比B基因型感染者平均年龄偏大，但无统计学意义；B、C基因型与临床疾病谱、血清生化指标(ALT、AST、TBIL、ALB)、HBeAg状态和DNA定量之间有一定的相关性。 3.技术的创造性与先进性： (1)我们应用PCR荧光法对甘肃地区慢性HBV感染者血清中HBV DNA进行基因分型测定，并对其基因分布特点进行了分析，首次系统地探讨了甘肃地区HBV基因型与感染者年龄与性别、不同临床疾病谱、病毒复制水平及与肝功能的关系。 (2)首次发现甘肃地区HBV基因型的分布可能与性别有关，而与年龄无关。 4.技术的成熟程度，适用范围和安全性： 本研究采用PCR荧光法检测慢性HBV患者HBV基因型，能快速对乙型肝炎病毒B基因型、C基因型以及B/C混合基因型进行检测，特异性和敏感性高，结果准确直观，操作简单安全，经济实用，可大规模地进行HBV基因型分析，适合基层医院开展且将为乙肝病毒变异的研究、发病机制的探讨、病情评估、治疗药物的选择和预后判定以及分子流行病学研究提供了有力工具。 5.应用情况及存在的问题： ①基因型与临床致病性的关系应扩大样本进一步研究。②该基因分型方法在B、C、D以外基因型的分型上受到限制。