(1)课题来源与背景： 　　甘肃省科技厅科技支撑项目，项目编号：090NKCA094。 　　（2）技术原理及性能指标： 　　基本原理是利用双链DNA分子热变性时嵌入其中的荧光染料释放发生减色效应形成特征熔解曲线，由于DNA序列的长度，GC含量以及碱基互补性的差异在运行高分辨率熔解后会形成不同的特异熔解曲线，其分辨精度可以达到对单个碱基差异的区分。相比传统的SNP或突变分析法和定量探针法，HRM简化了操作时间和步骤，大大降低了使用成本，并且实现了闭管操作，使其用于临床常规化检测成为可能。性能指标：建立高分辨熔解曲线分析技术平台，拥有适合qPCR仪检测分析的荧光染料和酶系统，形成检测IL-1和TNF以及IL-6基因启动子SNP的PCR-HRM或PCR-UP-HRM临床分子诊断方法和评价其性能指标如特异性、灵敏度和重复性等。 　　(3)技术的创新性与先进性： 　　本项目是引进国外新技术进行本土化再创新，通过筛选、优化酶系统和荧光染料研制本土化的PCR-HRM检测反应体系，其检测性能接近国外商品化PCR-HRM检测反应体系（EvaGreen MasterMix）。引进消化吸收国外最新技术，再创新建立本土化高分辨熔解分析技术平台，尤其是对荧光染料和酶系统的最佳组合和搭配研究以及与无标记探针技术的结合。将HRM技术用于临床分子诊断，制定其质量控制措施是对传统昂贵的探针法提出挑战，孕育新一代廉价基因分型分子诊断试剂。 　　(4)技术的成熟程度、适用范围和安全性：基本成熟，适用基因突变检测和扫描。 　　(5)应用情况及存在问题：正在推广应用。

　　(1)课题来源与背景： 　　甘肃省科技厅科技支撑项目，项目编号：090NKCA094。 　　（2）技术原理及性能指标： 　　基本原理是利用双链DNA分子热变性时嵌入其中的荧光染料释放发生减色效应形成特征熔解曲线，由于DNA序列的长度，GC含量以及碱基互补性的差异在运行高分辨率熔解后会形成不同的特异熔解曲线，其分辨精度可以达到对单个碱基差异的区分。相比传统的SNP或突变分析法和定量探针法，HRM简化了操作时间和步骤，大大降低了使用成本，并且实现了闭管操作，使其用于临床常规化检测成为可能。性能指标：建立高分辨熔解曲线分析技术平台，拥有适合qPCR仪检测分析的荧光染料和酶系统，形成检测IL-1和TNF以及IL-6基因启动子SNP的PCR-HRM或PCR-UP-HRM临床分子诊断方法和评价其性能指标如特异性、灵敏度和重复性等。 　　(3)技术的创新性与先进性： 　　本项目是引进国外新技术进行本土化再创新，通过筛选、优化酶系统和荧光染料研制本土化的PCR-HRM检测反应体系，其检测性能接近国外商品化PCR-HRM检测反应体系（EvaGreen MasterMix）。引进消化吸收国外最新技术，再创新建立本土化高分辨熔解分析技术平台，尤其是对荧光染料和酶系统的最佳组合和搭配研究以及与无标记探针技术的结合。将HRM技术用于临床分子诊断，制定其质量控制措施是对传统昂贵的探针法提出挑战，孕育新一代廉价基因分型分子诊断试剂。 　　(4)技术的成熟程度、适用范围和安全性：基本成熟，适用基因突变检测和扫描。 　　(5)应用情况及存在问题：正在推广应用。