本研究在已构建的人心肌肌钙蛋白I的原核表达载体的基础上，优化表达条件，提高目的蛋白在大肠杆菌中表达率，并建立纯化的方法，制备抗cTnI的高亲和力单克隆抗体及多克隆抗体。 　　影响cTnI在大肠杆菌（E.coli）表达的因素包括温度、pH、摇床转速、IPTG浓度、诱导时间、诱导时机的选择和培养基的组成，为全面考察各因素对cTnI蛋白表达的影响，采用单因素设计和正交试验设计都不能考察各因素间的交互作用，且工作量大，因此本研究采用两步试验设计，PBD（Plackett Burman Design）实验考察各因素间的对cTnI蛋白影响的大小，响应曲面法（RSM）用于优化表达条件，通过构建回归方程预测cTnI的表达率，并获得最优表达条件。该方法可以考察各因素对cTnI蛋白表达的影响，同时获得最优的表达条件，且减少了工作量。 　　采用硫酸铵沉淀和离子交换层析法纯化cTnI蛋白，经SDS-PAGE蛋白电泳检测目的蛋白，纯度达到99%以上。以纯化的cTnI蛋白为抗原，免疫BALB/c小鼠，取脾细胞同骨髓瘤细胞Sp2/0细胞融合，制备单克隆抗体；以cTnI为抗原免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体，并检测制备抗体的性质。 　　经过优化条件及纯化，获得了大量高纯度的cTnI蛋白，并制备了分泌高亲和力的抗cTnI的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为：C5B2、C5B3、C5B4、C5B1、B1A6。单克隆抗体的亲和力为1.08×10-9mol/L。多克隆抗体的效价达1：5000。 　　综上所述，经过表达条件优化，及其纯化获得较高纯度的cTnI，并制备了多株高亲和力的单克隆抗体和高效价多克隆抗体。

　　本研究在已构建的人心肌肌钙蛋白I的原核表达载体的基础上，优化表达条件，提高目的蛋白在大肠杆菌中表达率，并建立纯化的方法，制备抗cTnI的高亲和力单克隆抗体及多克隆抗体。 　　影响cTnI在大肠杆菌（E.coli）表达的因素包括温度、pH、摇床转速、IPTG浓度、诱导时间、诱导时机的选择和培养基的组成，为全面考察各因素对cTnI蛋白表达的影响，采用单因素设计和正交试验设计都不能考察各因素间的交互作用，且工作量大，因此本研究采用两步试验设计，PBD（Plackett Burman Design）实验考察各因素间的对cTnI蛋白影响的大小，响应曲面法（RSM）用于优化表达条件，通过构建回归方程预测cTnI的表达率，并获得最优表达条件。该方法可以考察各因素对cTnI蛋白表达的影响，同时获得最优的表达条件，且减少了工作量。 　　采用硫酸铵沉淀和离子交换层析法纯化cTnI蛋白，经SDS-PAGE蛋白电泳检测目的蛋白，纯度达到99%以上。以纯化的cTnI蛋白为抗原，免疫BALB/c小鼠，取脾细胞同骨髓瘤细胞Sp2/0细胞融合，制备单克隆抗体；以cTnI为抗原免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体，并检测制备抗体的性质。 　　经过优化条件及纯化，获得了大量高纯度的cTnI蛋白，并制备了分泌高亲和力的抗cTnI的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为：C5B2、C5B3、C5B4、C5B1、B1A6。单克隆抗体的亲和力为1.08×10-9mol/L。多克隆抗体的效价达1：5000。 　　综上所述，经过表达条件优化，及其纯化获得较高纯度的cTnI，并制备了多株高亲和力的单克隆抗体和高效价多克隆抗体。