环孢素A(CsA)广泛用于预防器官和组织移植时的排斥反应和自身免疫性疾病，但其治疗窗窄，长期定期监测CsA浓度对于指导临床合理用药具有重要作用。目前国内外对CsA血药浓度测定较普遍的方法是荧光偏振免疫法，但是需向雅培公司购买专用试剂盒，尚无替代品，价格昂贵。CsA血药浓度检测费用居高不下，导致部分器官移植患者减少甚至放弃CsA监测，最终造成慢性排斥或CsA中毒、移植失败。 为了将CsA试剂盒国产化、产业化，降低CsA血药浓度的监测价格，减轻器官移植患者的负担，延长患者的存活期。本项目制备了CsA试剂盒的主要组成部分：CsA抗原和CsA单克隆抗体，为CsA试剂盒的成功研制打下了坚实的基础。 1.CsA抗原的制备及鉴定 以高压汞灯作为紫外光源，叔丁醇作为反应溶剂，进行4-苯甲酰苯甲酸(BBa)和CsA的提氢—偶合及光环化加成反应，得到中间体CsA-BBa，溶于DMF中，再在EDCI作用下与水溶液中的聚L-赖氨酸(PL)反应，制备了完全抗原CsA-BBa-PL。并利用ELISA进行了抗原特异性鉴定，UV法确定了抗原的偶联效率。 2.CsA单克隆抗体的制备 采用单克隆抗体制备技术制备CsA单克隆抗体。用完全抗原免疫七周龄雌性BABL/C小鼠，ELISA法检测免疫小鼠血清抗体效价，待小鼠血清抗体效价达到理想值后，在聚乙二醇的作用下，将高效价小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，对融合细胞进行选择性培养和克隆，阳性克隆细胞株腹腔注射，最后从小鼠腹水中分离和纯化CsA单克隆抗体。 本课题的创新之处：①抗原合成过程反应装置组装简便，光源易获得，且成本低；②缩短了光化学反应时间，节约成本，提高产率，减少副产物的生成；③偶联反应操作简单，可以得到高质量的抗原；④鉴定方法简便易行；⑤成功制备了CsA单克隆抗体，为仿制雅培公司的试剂盒，使其国产化打下了坚实的基础。

环孢素A(CsA)广泛用于预防器官和组织移植时的排斥反应和自身免疫性疾病，但其治疗窗窄，长期定期监测CsA浓度对于指导临床合理用药具有重要作用。目前国内外对CsA血药浓度测定较普遍的方法是荧光偏振免疫法，但是需向雅培公司购买专用试剂盒，尚无替代品，价格昂贵。CsA血药浓度检测费用居高不下，导致部分器官移植患者减少甚至放弃CsA监测，最终造成慢性排斥或CsA中毒、移植失败。 为了将CsA试剂盒国产化、产业化，降低CsA血药浓度的监测价格，减轻器官移植患者的负担，延长患者的存活期。本项目制备了CsA试剂盒的主要组成部分：CsA抗原和CsA单克隆抗体，为CsA试剂盒的成功研制打下了坚实的基础。 1.CsA抗原的制备及鉴定 以高压汞灯作为紫外光源，叔丁醇作为反应溶剂，进行4-苯甲酰苯甲酸(BBa)和CsA的提氢—偶合及光环化加成反应，得到中间体CsA-BBa，溶于DMF中，再在EDCI作用下与水溶液中的聚L-赖氨酸(PL)反应，制备了完全抗原CsA-BBa-PL。并利用ELISA进行了抗原特异性鉴定，UV法确定了抗原的偶联效率。 2.CsA单克隆抗体的制备 采用单克隆抗体制备技术制备CsA单克隆抗体。用完全抗原免疫七周龄雌性BABL/C小鼠，ELISA法检测免疫小鼠血清抗体效价，待小鼠血清抗体效价达到理想值后，在聚乙二醇的作用下，将高效价小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，对融合细胞进行选择性培养和克隆，阳性克隆细胞株腹腔注射，最后从小鼠腹水中分离和纯化CsA单克隆抗体。 本课题的创新之处：①抗原合成过程反应装置组装简便，光源易获得，且成本低；②缩短了光化学反应时间，节约成本，提高产率，减少副产物的生成；③偶联反应操作简单，可以得到高质量的抗原；④鉴定方法简便易行；⑤成功制备了CsA单克隆抗体，为仿制雅培公司的试剂盒，使其国产化打下了坚实的基础。