本课题来源于浙江省医药卫生科技计划项目（2007B175）和杭州市医药研究近年国外文献报道定植性趋化是幽门螺杆菌引起感染的必要条件，Che蛋白家族二元信号传导系统（TCS）与其趋化定植密切相关，但胃粘膜细胞分泌的趋化信号分子性质、该TCS中信号分子受体MCPs及CheVs蛋白功能和作用机制不明。我们拟建立稳定可靠的幽门螺杆菌体外趋化和动物感染模型，采用基因重组表达、基因敲除、特异性抗体或其F（ab|）2封闭、RT-PCR、蛋白磷酸化定量检测等分子微生物学和细胞微生物学先进技术，确定不同胃粘膜细胞源性肽类趋化信号分子及其相应的MCPs，以及不同MCPs在细菌趋化定植过程的调控作用；了解cheVs基因表达产物有无磷酸酶活性及其与cheA基因之间的功能相关性，以及不同cheVs基因产物对细菌趋化运动的调控机制；以期进一步阐明幽门螺杆菌定植趋化相关TCS调控机制及其致病意义。 本研究的主要研究内容包括：采用硬琼脂法完成幽门螺杆菌体外趋化模型构建，构建幽门螺杆菌cheA和cheY原核表达系统，收集蛋白后进行了动物免疫，获得相应抗血清，完成特异性抗体和F（ab|）2制备工作，用制备的抗体对幽门螺杆菌进行封闭，采取阳性趋化物验证幽门螺杆菌的趋化效果以及二元信号阻断剂氯氰碘柳胺阻断后用阳性趋化物验证幽门螺杆菌的趋化效果。构建幽门螺杆菌NCTC11637cheA基因缺失突变株。采用改良HAP 法观察幽门螺杆菌cheA基因缺失株体外趋化效果。收集11637野生株和cheA突变株新鲜培养物，与不同浓度的盐酸作用一段时间后，用磷酸化蛋白检测试剂盒检测cheA和cheY磷酸化蛋白水平。观察NCTC11637cheA基因缺失突变小鼠定植情况。 本研究得出以下研究结果： 1、H+是幽门螺杆菌NCTC11637株趋化的主要信号。 2、CheA在幽门螺杆菌趋化过程中起关键作用。 3、CheA和CheY在幽门螺杆菌对H+的趋化过程中表现为去磷酸化状态。 4、cheA在幽门螺杆菌的体内定植与致病过程中起重要作用。

本课题来源于浙江省医药卫生科技计划项目（2007B175）和杭州市医药研究近年国外文献报道定植性趋化是幽门螺杆菌引起感染的必要条件，Che蛋白家族二元信号传导系统（TCS）与其趋化定植密切相关，但胃粘膜细胞分泌的趋化信号分子性质、该TCS中信号分子受体MCPs及CheVs蛋白功能和作用机制不明。我们拟建立稳定可靠的幽门螺杆菌体外趋化和动物感染模型，采用基因重组表达、基因敲除、特异性抗体或其F（ab|）2封闭、RT-PCR、蛋白磷酸化定量检测等分子微生物学和细胞微生物学先进技术，确定不同胃粘膜细胞源性肽类趋化信号分子及其相应的MCPs，以及不同MCPs在细菌趋化定植过程的调控作用；了解cheVs基因表达产物有无磷酸酶活性及其与cheA基因之间的功能相关性，以及不同cheVs基因产物对细菌趋化运动的调控机制；以期进一步阐明幽门螺杆菌定植趋化相关TCS调控机制及其致病意义。 本研究的主要研究内容包括：采用硬琼脂法完成幽门螺杆菌体外趋化模型构建，构建幽门螺杆菌cheA和cheY原核表达系统，收集蛋白后进行了动物免疫，获得相应抗血清，完成特异性抗体和F（ab|）2制备工作，用制备的抗体对幽门螺杆菌进行封闭，采取阳性趋化物验证幽门螺杆菌的趋化效果以及二元信号阻断剂氯氰碘柳胺阻断后用阳性趋化物验证幽门螺杆菌的趋化效果。构建幽门螺杆菌NCTC11637cheA基因缺失突变株。采用改良HAP 法观察幽门螺杆菌cheA基因缺失株体外趋化效果。收集11637野生株和cheA突变株新鲜培养物，与不同浓度的盐酸作用一段时间后，用磷酸化蛋白检测试剂盒检测cheA和cheY磷酸化蛋白水平。观察NCTC11637cheA基因缺失突变小鼠定植情况。 本研究得出以下研究结果： 1、H+是幽门螺杆菌NCTC11637株趋化的主要信号。 2、CheA在幽门螺杆菌趋化过程中起关键作用。 3、CheA和CheY在幽门螺杆菌对H+的趋化过程中表现为去磷酸化状态。 4、cheA在幽门螺杆菌的体内定植与致病过程中起重要作用。