简要技术说明 本研究通过克隆表达及纯化结核杆菌H37Rv重组抗原及蛋白ESAT-6、Pst-S1、CFP10、KatG、CW、LAM等作为靶抗原，对其免疫原性进行鉴定，检测结核病人TB患者血清，观察其在免疫学诊断中的敏感性和特异性。并以ESAT-6、CFP10为靶抗原从构建的抗体库中筛选基因结构明确，免疫亲和力稳定的抗结核杆菌重组抗原ESAT-6、CFP10的阳性克隆，通过基因工程抗体ScFv检测CAg，可以避免假阳性，提高特异性和敏感性，并可区分活动性结核病人与潜伏感染者，从而作为病原学确诊的依据，并对抗体蛋白的基因序列、表达及生化性质进行了深入研究。 以重组蛋白ESAT-6、38KD(Pst-S1)和CW为抗原，LAM为对照，用纳米金标法DICFA检测肺结核病人及正常人血清中抗结核抗体的敏感性和特异性。表明重组蛋白抗原有较好的敏感性和特异性，且与痰涂片有较高的符合率，有助于结核病的血清学诊断及流行病学调查。DIGFA与ELISA比较表明，两法检测交叉反应血清554份和健康人血清306份，其特异性达92.5%，与ELISA法的符合率为98.1%，这一结果与国内外其他文献报道基本一致。 应用前景 (1)诊断试剂开发应用：将与各级结核病防治机构合作，推广应用多抗原同步联合检测结核病血清学诊断试剂，制成试纸条或抗原蛋白生物芯片，用纳米金标法DIGFA和ELISA同步联合检测从而达到确诊结核病的目的。本项目系统研究了克隆表达纯化的结核杆菌H37Rv重组抗原ESAT-6、PstS-1、CFP10、KatG、CW及融合蛋白ESAT-6-CFP10、PstS1-HspX等，建立了DIGFA检测方法，表明重组蛋白抗原有较好的敏感性和特异性，有助于结核病的血清学诊断。该方法在流行病学调查及病人初筛中也具有较高的推广应用价值。 (2)CAg检测及靶向药物研制：该ScFv重组抗体检测循环抗原，为区分活动性结核病人与潜伏感染者提供新的诊断方法。ScFv重组抗体与治疗结核药物耦合，可为生物靶向药物的研制和耐药性结核杆菌的治疗提供新的有效途径。 (3)新型治疗性疫苗的研制：由于耐多药结核病的流行，近年来通过免疫调节治疗结核病成为研究的热点之一。治疗性疫苗的研究与开发成为十分重要的研究方向。因此将本研究中的多种重组抗原蛋白与脂质体包被免疫动物，实验观察其治疗效果，以期寻找用于治疗耐多药结核病的有效疫苗。

简要技术说明 本研究通过克隆表达及纯化结核杆菌H37Rv重组抗原及蛋白ESAT-6、Pst-S1、CFP10、KatG、CW、LAM等作为靶抗原，对其免疫原性进行鉴定，检测结核病人TB患者血清，观察其在免疫学诊断中的敏感性和特异性。并以ESAT-6、CFP10为靶抗原从构建的抗体库中筛选基因结构明确，免疫亲和力稳定的抗结核杆菌重组抗原ESAT-6、CFP10的阳性克隆，通过基因工程抗体ScFv检测CAg，可以避免假阳性，提高特异性和敏感性，并可区分活动性结核病人与潜伏感染者，从而作为病原学确诊的依据，并对抗体蛋白的基因序列、表达及生化性质进行了深入研究。 以重组蛋白ESAT-6、38KD(Pst-S1)和CW为抗原，LAM为对照，用纳米金标法DICFA检测肺结核病人及正常人血清中抗结核抗体的敏感性和特异性。表明重组蛋白抗原有较好的敏感性和特异性，且与痰涂片有较高的符合率，有助于结核病的血清学诊断及流行病学调查。DIGFA与ELISA比较表明，两法检测交叉反应血清554份和健康人血清306份，其特异性达92.5%，与ELISA法的符合率为98.1%，这一结果与国内外其他文献报道基本一致。 应用前景 (1)诊断试剂开发应用：将与各级结核病防治机构合作，推广应用多抗原同步联合检测结核病血清学诊断试剂，制成试纸条或抗原蛋白生物芯片，用纳米金标法DIGFA和ELISA同步联合检测从而达到确诊结核病的目的。本项目系统研究了克隆表达纯化的结核杆菌H37Rv重组抗原ESAT-6、PstS-1、CFP10、KatG、CW及融合蛋白ESAT-6-CFP10、PstS1-HspX等，建立了DIGFA检测方法，表明重组蛋白抗原有较好的敏感性和特异性，有助于结核病的血清学诊断。该方法在流行病学调查及病人初筛中也具有较高的推广应用价值。 (2)CAg检测及靶向药物研制：该ScFv重组抗体检测循环抗原，为区分活动性结核病人与潜伏感染者提供新的诊断方法。ScFv重组抗体与治疗结核药物耦合，可为生物靶向药物的研制和耐药性结核杆菌的治疗提供新的有效途径。 (3)新型治疗性疫苗的研制：由于耐多药结核病的流行，近年来通过免疫调节治疗结核病成为研究的热点之一。治疗性疫苗的研究与开发成为十分重要的研究方向。因此将本研究中的多种重组抗原蛋白与脂质体包被免疫动物，实验观察其治疗效果，以期寻找用于治疗耐多药结核病的有效疫苗。