一、简要技术说明 由于孕妇在妊娠期间如果感染了弓形虫，会对胎儿造成严重的危害，常致胎儿畸形，且病死率高，是优生学关注的严重问题，因此对孕妇和胎儿弓形虫感染者，早期诊断具有非常重要的意义。但传统的检测方法存在诸多不足之处，如病原学诊断费时且易漏检、免疫学检测抗体出现较晚等。因此快速、灵敏、特异且能提供定量结果的定量PCR技术，在弓形虫病诊断中的应用日趋增多。本研究首先采用鼠尿液为标本，以特异性强的弓形虫B1 基因作为靶基因，建立一种取材方便、灵敏度高、特异性强的实时荧光定量PCR法。同时为检测患者尿液的弓形虫DNA 提供检测平台。本院三名外周血弓形虫DNA阳性的尿液标本经该体系检测后全部阳性，与外周血弓形虫DNA的检测符合率达100﹪。证明该体系灵敏度、特异性和稳定性都达到预期目标。 早在十多年前，就有研究者以小鼠尿液、腹水为标本采用PCR进行弓形虫DNA的检测，但之后没有采用更先进的实时荧光定量PCR方法进行尿液弓形虫DNA的检测，具有创新性。 通过方法学评价，其灵敏度、重复性、线性、特异性、稳定性方面都很可靠。检测灵敏度为104拷贝/ml。重复性：5×107、5×106、5×105、5×104 拷贝/ml的每个浓度的平均Ct值分别为18.18、23.05、25.87和29.71；批内平均cv值2.42﹪，批间cv值4.18﹪。EP6-A方案确定的线性范围为（103～107） 拷贝/ml。拟合6组标准曲线，得到标准曲线的决定系数均为R2＞0.99。特异性实验表明，9种相关病原微生物均无特异性扩增曲线，也无相应条带出现，特异性为100﹪。参照品4个月的稳定性表明：5×107、5×106、5×105和5×104 拷贝/ml的参照品各浓度其Ct均值分别为18.24、23.08、26.02和29.74；SD值平均0.94﹪，cv值平均4.18﹪，阳性率100﹪。 二、推广应用前景 将该法用于临床免疫缺陷病人（如癌症病人等）与孕妇的尿液检测，真正实现一种快速、灵敏、特异且无创伤性的弓形虫诊断方法，其研究结果既有助于弓形虫感染的早期诊断，也有助于对疾病治疗过程的监测，对于优生优育、提高人口素质有很大帮助。 将通过临床检验中心年会上发言，举办学习班等形式进行推广。

一、简要技术说明 由于孕妇在妊娠期间如果感染了弓形虫，会对胎儿造成严重的危害，常致胎儿畸形，且病死率高，是优生学关注的严重问题，因此对孕妇和胎儿弓形虫感染者，早期诊断具有非常重要的意义。但传统的检测方法存在诸多不足之处，如病原学诊断费时且易漏检、免疫学检测抗体出现较晚等。因此快速、灵敏、特异且能提供定量结果的定量PCR技术，在弓形虫病诊断中的应用日趋增多。本研究首先采用鼠尿液为标本，以特异性强的弓形虫B1 基因作为靶基因，建立一种取材方便、灵敏度高、特异性强的实时荧光定量PCR法。同时为检测患者尿液的弓形虫DNA 提供检测平台。本院三名外周血弓形虫DNA阳性的尿液标本经该体系检测后全部阳性，与外周血弓形虫DNA的检测符合率达100﹪。证明该体系灵敏度、特异性和稳定性都达到预期目标。 早在十多年前，就有研究者以小鼠尿液、腹水为标本采用PCR进行弓形虫DNA的检测，但之后没有采用更先进的实时荧光定量PCR方法进行尿液弓形虫DNA的检测，具有创新性。 通过方法学评价，其灵敏度、重复性、线性、特异性、稳定性方面都很可靠。检测灵敏度为104拷贝/ml。重复性：5×107、5×106、5×105、5×104 拷贝/ml的每个浓度的平均Ct值分别为18.18、23.05、25.87和29.71；批内平均cv值2.42﹪，批间cv值4.18﹪。EP6-A方案确定的线性范围为（103～107） 拷贝/ml。拟合6组标准曲线，得到标准曲线的决定系数均为R2＞0.99。特异性实验表明，9种相关病原微生物均无特异性扩增曲线，也无相应条带出现，特异性为100﹪。参照品4个月的稳定性表明：5×107、5×106、5×105和5×104 拷贝/ml的参照品各浓度其Ct均值分别为18.24、23.08、26.02和29.74；SD值平均0.94﹪，cv值平均4.18﹪，阳性率100﹪。 二、推广应用前景 将该法用于临床免疫缺陷病人（如癌症病人等）与孕妇的尿液检测，真正实现一种快速、灵敏、特异且无创伤性的弓形虫诊断方法，其研究结果既有助于弓形虫感染的早期诊断，也有助于对疾病治疗过程的监测，对于优生优育、提高人口素质有很大帮助。 将通过临床检验中心年会上发言，举办学习班等形式进行推广。