副溶血性弧菌引起的腹泻或食物中毒发病急、传播快，特别是暴发性或群发性的食物中毒不仅造成巨大的经济损失、给人民群众的身体健康带来极大危害，而且有较大的社会影响；外环境（海水、鱼虾养殖水中）副溶血性弧菌的污染状况监测也应引起足够重视。所以及早掌握副溶血性弧菌在本地区的流行特征，如血清型、毒力基因携带情况、药物敏感型等，可为疾病的治疗和控制决策提供可靠的技术依据，提高处理突发公共卫生事件的能力。另外，通过基因同源性分析，可追踪传染源和确定传播途径，对副溶血性弧菌在人群或环境中的病原污染甚至爆发进行预警，从而最大程度避免发病或减少损失。 本课题通过对闵行区食物中毒来源和食源性样品来源的副溶血性弧菌进行了血清分型、毒力基因检测、药物敏感性、PFGE分型等技术手段，获得了以下相关指标：2007～2008年共发生的50起食物中毒事件中，由副溶血性弧菌引起的有28起，占半数以上，共收集到56株副溶血性弧菌。其中腹泻来源的有54株，49株为O3：K6血清型，占87.5﹪，O4：K8型2株，O1：K25型2株，O4：K68型1株，都携带tdh基因而不携带 trh基因；食品株O1：K56型1株，不能分型1株，都未携带tdh和trh基因。药物敏感性试验发现对阿莫西林、氨苄西林高度耐药，对链霉素中度耐药；对环丙沙星、庆大霉素、奥格门汀、复方新诺明、四环素、复方磺胺甲恶唑、头孢类抗生素100﹪ 敏感，对左氧氟沙星、阿米卡星、氯霉素有部分耐药。 PFGE获得了55株食物中毒来源的副溶血性弧菌DNA带型，可分为30种PFGE图谱。48株O3：K6血清型菌株中，有38株菌共16种PFGE图谱仅有4～5个条带的差异，表明此38株副溶血性弧菌为可能相关菌株属于同一个克隆群，为2007～2008年引起闵行区食物中毒的优势流行菌型；2株O1：K25血清型菌株PFGE图谱与大部分O3：K6型菌株PFGE图谱也有85.07﹪相似度，均为流行血清型；可疑食品分离的2株菌株之间PFGE带型完全不同，并与所有的肛拭分离株亦有很大的差异，相似度低于50﹪，可以认为与上述食物中毒暴发事件不相关。 2007～2009年在7大类共373份食源性样品中，检出副溶血性弧菌38株，阳性检出率10.2﹪。海鱼类、家畜肉类和熟食类样品中检出率较高。抗生素耐药试验除对奥格门汀耐药较严重外，其余与食物中毒来源株相似。38株食源性样品株都未携带tdh、trh毒力基因，为非产毒株，这与闵行区食物中毒人源株携带tdh基因不一致。PFGE分型结果显示3年间食品分离株亲缘关系较远，而且与相应年份食物中毒分离株的PFGE带型相比同源性也很低，说明这些食源性菌株为环境生态株。 在对副溶血性弧菌进行血清分型时，O抗原玻片凝集试验必须用3﹪盐水洗下斜面上的菌苔（菌液须较浓），加塞经121℃高压1小时，待凉至常温后，7000r/min离心5min，挑取浓缩的少许沉淀物做O1～O11玻片凝集试验。用脉冲电场凝胶电脉（PFGE）技术进行分子分型，优化各种技术参数。其中限制性内切酶的选择非常重要，Not I和XbaI可把DNA分子酶切成合适的大片段，有利于电泳分离；脉冲条件设置为10～35s，线性递增，电压6 v/cm，脉冲角度120° ，初始电流控制在135～145mA之间，电泳时间19h，全程温度控制在14℃。 本课题创新性： 1.首次对闵行区食物中毒和食源性样品来源副溶血性弧菌进行系统研究：血清分型，分子分型，毒力基因携带情况，抗生素耐药性试验； 2.建立了本实验室副溶血性弧菌PFGE分型方法； 3.通过PFGE分型研究，对发生于2007、2008年的副溶血性弧菌食物中毒事件进行了成功溯源； 4.获取了闵行区食物中毒和食源性样品来源副溶血性弧菌DNA指纹图谱，为建立副溶血性弧菌指纹图谱数据库打下基础。 本研究成果应用于突发公共卫生事件病原的确定和流行病学调查中传染源的追踪，为疾病控制和预警提供技术支持。应用于各级疾病预防控制机构，为制定副溶血性弧菌的防控措施提供依据。

副溶血性弧菌引起的腹泻或食物中毒发病急、传播快，特别是暴发性或群发性的食物中毒不仅造成巨大的经济损失、给人民群众的身体健康带来极大危害，而且有较大的社会影响；外环境（海水、鱼虾养殖水中）副溶血性弧菌的污染状况监测也应引起足够重视。所以及早掌握副溶血性弧菌在本地区的流行特征，如血清型、毒力基因携带情况、药物敏感型等，可为疾病的治疗和控制决策提供可靠的技术依据，提高处理突发公共卫生事件的能力。另外，通过基因同源性分析，可追踪传染源和确定传播途径，对副溶血性弧菌在人群或环境中的病原污染甚至爆发进行预警，从而最大程度避免发病或减少损失。 本课题通过对闵行区食物中毒来源和食源性样品来源的副溶血性弧菌进行了血清分型、毒力基因检测、药物敏感性、PFGE分型等技术手段，获得了以下相关指标：2007～2008年共发生的50起食物中毒事件中，由副溶血性弧菌引起的有28起，占半数以上，共收集到56株副溶血性弧菌。其中腹泻来源的有54株，49株为O3：K6血清型，占87.5﹪，O4：K8型2株，O1：K25型2株，O4：K68型1株，都携带tdh基因而不携带 trh基因；食品株O1：K56型1株，不能分型1株，都未携带tdh和trh基因。药物敏感性试验发现对阿莫西林、氨苄西林高度耐药，对链霉素中度耐药；对环丙沙星、庆大霉素、奥格门汀、复方新诺明、四环素、复方磺胺甲恶唑、头孢类抗生素100﹪ 敏感，对左氧氟沙星、阿米卡星、氯霉素有部分耐药。 PFGE获得了55株食物中毒来源的副溶血性弧菌DNA带型，可分为30种PFGE图谱。48株O3：K6血清型菌株中，有38株菌共16种PFGE图谱仅有4～5个条带的差异，表明此38株副溶血性弧菌为可能相关菌株属于同一个克隆群，为2007～2008年引起闵行区食物中毒的优势流行菌型；2株O1：K25血清型菌株PFGE图谱与大部分O3：K6型菌株PFGE图谱也有85.07﹪相似度，均为流行血清型；可疑食品分离的2株菌株之间PFGE带型完全不同，并与所有的肛拭分离株亦有很大的差异，相似度低于50﹪，可以认为与上述食物中毒暴发事件不相关。 2007～2009年在7大类共373份食源性样品中，检出副溶血性弧菌38株，阳性检出率10.2﹪。海鱼类、家畜肉类和熟食类样品中检出率较高。抗生素耐药试验除对奥格门汀耐药较严重外，其余与食物中毒来源株相似。38株食源性样品株都未携带tdh、trh毒力基因，为非产毒株，这与闵行区食物中毒人源株携带tdh基因不一致。PFGE分型结果显示3年间食品分离株亲缘关系较远，而且与相应年份食物中毒分离株的PFGE带型相比同源性也很低，说明这些食源性菌株为环境生态株。 在对副溶血性弧菌进行血清分型时，O抗原玻片凝集试验必须用3﹪盐水洗下斜面上的菌苔（菌液须较浓），加塞经121℃高压1小时，待凉至常温后，7000r/min离心5min，挑取浓缩的少许沉淀物做O1～O11玻片凝集试验。用脉冲电场凝胶电脉（PFGE）技术进行分子分型，优化各种技术参数。其中限制性内切酶的选择非常重要，Not I和XbaI可把DNA分子酶切成合适的大片段，有利于电泳分离；脉冲条件设置为10～35s，线性递增，电压6 v/cm，脉冲角度120° ，初始电流控制在135～145mA之间，电泳时间19h，全程温度控制在14℃。 本课题创新性： 1.首次对闵行区食物中毒和食源性样品来源副溶血性弧菌进行系统研究：血清分型，分子分型，毒力基因携带情况，抗生素耐药性试验； 2.建立了本实验室副溶血性弧菌PFGE分型方法； 3.通过PFGE分型研究，对发生于2007、2008年的副溶血性弧菌食物中毒事件进行了成功溯源； 4.获取了闵行区食物中毒和食源性样品来源副溶血性弧菌DNA指纹图谱，为建立副溶血性弧菌指纹图谱数据库打下基础。 本研究成果应用于突发公共卫生事件病原的确定和流行病学调查中传染源的追踪，为疾病控制和预警提供技术支持。应用于各级疾病预防控制机构，为制定副溶血性弧菌的防控措施提供依据。