一、课题来源与背景： 　　本课题来源于哈尔滨市科学技术局。 　　布病广泛存在于世界各地，我国有布病现患30～50万人。实验室检测布病的传统方法特异性差、敏感性低，易出现假阳性，容易散毒，危险性大。实时定量荧光PCR技术是分子生物学前沿技术，具有灵敏度高、特异性强、检测时间短、可定量分析等优点，因此，研究开发了用本法检测血液中的布鲁氏菌基因组以替代现有检验方法。 　　二、技术原理及性能指标： 　　实时荧光定量PCR技术是通过始点定量和荧光检测系统实时监测累积荧光强度而实现的。本法检测布鲁氏菌的灵敏度为5个拷贝/uL的模板DNA；批间及批内CT值CV都小于8﹪，检测体系稳定，重复性好，且特异性强。 　　三、技术的创造性与先进性： 　　创造性：自主设计并合成用于本研究的一对特异性引物和荧光探针；获得了从血液中提取布鲁氏菌基因组最佳方法；建立了本法检测血液中布鲁氏菌基因组方法；获得了本方法检测布鲁氏菌特异性、灵敏性及重复性数据。 　　先进性：在国内用本法检测血液中的布鲁氏菌属首创，在国际上处于领先水平。 　　四、技术的成熟程度，适用范围和安全性： 　　本法已进行了临床样品检测，阴性及阳性样品符合率较高，为研制用本法检测血液中布鲁氏菌诊断试剂盒奠定基础。可应用于临床检测、疾病研究、动物及海关检疫、食品卫生等方面。本法操作简单，扩增和检测在封闭管内一步完成，交叉污染和污染环境机会少，无后处理，不用杂交、电泳等，安全性高。 　　五、应用情况及存在的问题： 用本法检测临床样品85份，阳性符合率79﹪；阴性符合率为100﹪；临床症状可疑标本30份，2例阳性。如进行试剂盒研制，应增加阳性血液标本采集数量。

　　一、课题来源与背景： 　　本课题来源于哈尔滨市科学技术局。 　　布病广泛存在于世界各地，我国有布病现患30～50万人。实验室检测布病的传统方法特异性差、敏感性低，易出现假阳性，容易散毒，危险性大。实时定量荧光PCR技术是分子生物学前沿技术，具有灵敏度高、特异性强、检测时间短、可定量分析等优点，因此，研究开发了用本法检测血液中的布鲁氏菌基因组以替代现有检验方法。 　　二、技术原理及性能指标： 　　实时荧光定量PCR技术是通过始点定量和荧光检测系统实时监测累积荧光强度而实现的。本法检测布鲁氏菌的灵敏度为5个拷贝/uL的模板DNA；批间及批内CT值CV都小于8﹪，检测体系稳定，重复性好，且特异性强。 　　三、技术的创造性与先进性： 　　创造性：自主设计并合成用于本研究的一对特异性引物和荧光探针；获得了从血液中提取布鲁氏菌基因组最佳方法；建立了本法检测血液中布鲁氏菌基因组方法；获得了本方法检测布鲁氏菌特异性、灵敏性及重复性数据。 　　先进性：在国内用本法检测血液中的布鲁氏菌属首创，在国际上处于领先水平。 　　四、技术的成熟程度，适用范围和安全性： 　　本法已进行了临床样品检测，阴性及阳性样品符合率较高，为研制用本法检测血液中布鲁氏菌诊断试剂盒奠定基础。可应用于临床检测、疾病研究、动物及海关检疫、食品卫生等方面。本法操作简单，扩增和检测在封闭管内一步完成，交叉污染和污染环境机会少，无后处理，不用杂交、电泳等，安全性高。 　　五、应用情况及存在的问题： 用本法检测临床样品85份，阳性符合率79﹪；阴性符合率为100﹪；临床症状可疑标本30份，2例阳性。如进行试剂盒研制，应增加阳性血液标本采集数量。