技术说明及主要技术性能指标： 　　本研究为黑龙江省科技攻关课题，旨在通过分子生物学相关技术检测黑龙江地区汉坦病毒（Hantavirus，HV）所致疾病——肾综合征出血热（hemorrhagic fever with renal syndrome ，HFRS）病人携带HV的基因分型及各型在感染者中的比例，以明确近年来我省HFRS临床病情变化与HV基因型分布变化间的关系，对各地区典型病例及重症病例检测到的HV进行基因测序，与国内外流行株和疫苗株进行序列比对，明确是否有新HV亚型的存在以及HV基因变异与HFRS病情的关系。以获得黑龙江地区HV流行病学新特征的分子病原学依据，分析近年来HFRS临床疾病谱发生变化的分子病原学机制，从而进一步加强对该病临床诊治的认识，并对我省的疫苗免疫策略提供分子生物学依据。 　　研究结果： 　　1、黑龙江地区近年来HFRS感染特点与十年前比较出现了出现了春夏季发病增多，农民发病比例下降，轻型和不典型病例增多的新特点，以上现象出现的原因为SEOV（Seoul virus）感染病例增多； 　　2、对黑龙江地区新老疫区的大规模HFRS病例研究表明，HTNV（Hantaan virus）感染与SEOV感染并存，且SEOV感染的比例上升，该地区已由过去的单纯HTN型疫区转变为HTN型和SEO型并存的混合型疫区，黑龙江农垦等老疫区仍以HTNV感染为主，而哈尔滨等大中城市以SEOV感染为主；目前应用的HTN型疫苗对该地区HTNV感染的保护率较高，对SEOV的交叉保护率较差； 　　3、从黑龙江地区HFRS感染者检测到的HV M 基因片段测序研究表明，该地区HTNV型与代表株76-118和我国疫苗生产株HTNV LR1高度同源，而与国内其他地区HTNV分离株同源性较差；而SEOV M 基因片段序列与国内外分离株比较差异不明显； 　　4、通过对HTNV感染和SEOV感染的临床表现和实验室检查的对比研究表明，发热和尿蛋白阳性见于所有两型患者，为HFRS早期诊断的必要阳性指标。早期临床表现除出血表现和水肿征HTNV较严重外，其他症状体征在两型感染中均无明显差异。与HTNV感染相比，SEOV感染肾功损伤较轻甚至正常，而发热期较长，出现外周血WBC正常甚至降低的情况多见，肝功损伤多见且与病情严重程度相关，越期现象多见，以上这些不典型的表现易导致早期误诊，需引起临床医生重视。 　　5、总结分析上述研究发现，在国内核心期刊发表文献3篇，另有两篇分别投稿至Scandinavian Journal of Infectious Diseases和Clinical and experimental medicine。 　　推广应用的范围、条件和前景： 　　1、黑龙江省为中国最早发现HFRS的省份，重症病例多，近年发病率始终位居全国前列，但针对HFRS患者感染的基因型分布情况缺乏大规模分子生物流行病学资料。本研究填补了此项空白，证实了该地区已由过去单纯的HTNV疫区转变为HTNV和SEOV混合疫区，老疫区与大中城市新疫区的基因型分布不同，而两型HV的单价疫苗交叉保护作用有限，因此应根据各地的不同情况应用不同型别的出血热疫苗，对于混合感染的疫区建议应用双价出血热疫苗，以降低HFRS的发病率，防患于未然，从而减轻因该病流行给国家、社会和个人造成的经济负担。 　　2、通过对HTNV和SEOV感染所致的HFRS患者的系统临床对照研究，发现了SEOV引起的HFRS的一些新特点，对于提高该病早期的临床诊断率，减少误诊误治提供了重要的参考。对于广大传染科医生和其他一些相关专业医生（急诊科、泌尿科、血液科等）更好地在早期鉴别该病具有重要的参考价值，从而能够使HFRS患者得到及时有效的诊治，缩短住院时间、降低该病的重症发生率和死亡率。 　　3、汉坦病毒为负链RNA病毒，基因检测需要逆转录过程，且病人外周血携带的病毒量较少、带毒期短暂，故目前国内外的研究多集中于HV宿主动物的研究，而从HFRS感染者中分离到HV全基因序列仍较困难，黑龙江地区作为HFRS最早的发源地和HFRS重疫区，目前尚缺乏从HFRS患者血标本或组织中分离并保存、传代的HV毒株。 　　因此本研究应进一步扩大疫区规模，与黑龙江省疾控中心合作，结合各地区的HFRS流行病学最新资料，选取不同地理生境采集典型病例，同步开展疫区带毒宿主动物的研究，进而分离HV毒株，进行全基因测序并构建种系发生树，明确各地区HTNV和SEOV的亚型，进行HV培养并传代保存，以便系统地研究并动态的监测我省HFRS流行病学和临床疾病谱变化情况，为我省该病的防治工作提供坚实的理论基础。

　　技术说明及主要技术性能指标： 　　本研究为黑龙江省科技攻关课题，旨在通过分子生物学相关技术检测黑龙江地区汉坦病毒（Hantavirus，HV）所致疾病——肾综合征出血热（hemorrhagic fever with renal syndrome ，HFRS）病人携带HV的基因分型及各型在感染者中的比例，以明确近年来我省HFRS临床病情变化与HV基因型分布变化间的关系，对各地区典型病例及重症病例检测到的HV进行基因测序，与国内外流行株和疫苗株进行序列比对，明确是否有新HV亚型的存在以及HV基因变异与HFRS病情的关系。以获得黑龙江地区HV流行病学新特征的分子病原学依据，分析近年来HFRS临床疾病谱发生变化的分子病原学机制，从而进一步加强对该病临床诊治的认识，并对我省的疫苗免疫策略提供分子生物学依据。 　　研究结果： 　　1、黑龙江地区近年来HFRS感染特点与十年前比较出现了出现了春夏季发病增多，农民发病比例下降，轻型和不典型病例增多的新特点，以上现象出现的原因为SEOV（Seoul virus）感染病例增多； 　　2、对黑龙江地区新老疫区的大规模HFRS病例研究表明，HTNV（Hantaan virus）感染与SEOV感染并存，且SEOV感染的比例上升，该地区已由过去的单纯HTN型疫区转变为HTN型和SEO型并存的混合型疫区，黑龙江农垦等老疫区仍以HTNV感染为主，而哈尔滨等大中城市以SEOV感染为主；目前应用的HTN型疫苗对该地区HTNV感染的保护率较高，对SEOV的交叉保护率较差； 　　3、从黑龙江地区HFRS感染者检测到的HV M 基因片段测序研究表明，该地区HTNV型与代表株76-118和我国疫苗生产株HTNV LR1高度同源，而与国内其他地区HTNV分离株同源性较差；而SEOV M 基因片段序列与国内外分离株比较差异不明显； 　　4、通过对HTNV感染和SEOV感染的临床表现和实验室检查的对比研究表明，发热和尿蛋白阳性见于所有两型患者，为HFRS早期诊断的必要阳性指标。早期临床表现除出血表现和水肿征HTNV较严重外，其他症状体征在两型感染中均无明显差异。与HTNV感染相比，SEOV感染肾功损伤较轻甚至正常，而发热期较长，出现外周血WBC正常甚至降低的情况多见，肝功损伤多见且与病情严重程度相关，越期现象多见，以上这些不典型的表现易导致早期误诊，需引起临床医生重视。 　　5、总结分析上述研究发现，在国内核心期刊发表文献3篇，另有两篇分别投稿至Scandinavian Journal of Infectious Diseases和Clinical and experimental medicine。 　　推广应用的范围、条件和前景： 　　1、黑龙江省为中国最早发现HFRS的省份，重症病例多，近年发病率始终位居全国前列，但针对HFRS患者感染的基因型分布情况缺乏大规模分子生物流行病学资料。本研究填补了此项空白，证实了该地区已由过去单纯的HTNV疫区转变为HTNV和SEOV混合疫区，老疫区与大中城市新疫区的基因型分布不同，而两型HV的单价疫苗交叉保护作用有限，因此应根据各地的不同情况应用不同型别的出血热疫苗，对于混合感染的疫区建议应用双价出血热疫苗，以降低HFRS的发病率，防患于未然，从而减轻因该病流行给国家、社会和个人造成的经济负担。 　　2、通过对HTNV和SEOV感染所致的HFRS患者的系统临床对照研究，发现了SEOV引起的HFRS的一些新特点，对于提高该病早期的临床诊断率，减少误诊误治提供了重要的参考。对于广大传染科医生和其他一些相关专业医生（急诊科、泌尿科、血液科等）更好地在早期鉴别该病具有重要的参考价值，从而能够使HFRS患者得到及时有效的诊治，缩短住院时间、降低该病的重症发生率和死亡率。 　　3、汉坦病毒为负链RNA病毒，基因检测需要逆转录过程，且病人外周血携带的病毒量较少、带毒期短暂，故目前国内外的研究多集中于HV宿主动物的研究，而从HFRS感染者中分离到HV全基因序列仍较困难，黑龙江地区作为HFRS最早的发源地和HFRS重疫区，目前尚缺乏从HFRS患者血标本或组织中分离并保存、传代的HV毒株。 　　因此本研究应进一步扩大疫区规模，与黑龙江省疾控中心合作，结合各地区的HFRS流行病学最新资料，选取不同地理生境采集典型病例，同步开展疫区带毒宿主动物的研究，进而分离HV毒株，进行全基因测序并构建种系发生树，明确各地区HTNV和SEOV的亚型，进行HV培养并传代保存，以便系统地研究并动态的监测我省HFRS流行病学和临床疾病谱变化情况，为我省该病的防治工作提供坚实的理论基础。