常见多重耐药的铜绿假单胞菌是临床上较为棘手的致病菌，研究其致病性相关功能基因具有重要意义。项目组构建铜绿假单胞菌pKMF41-Mu转座突变文库，筛选鉴定47个致病性和耐药性相关新基因；应用绿色荧光蛋白融合示踪技术证明了鞭毛运动相关基因pfm的表达产物在胞内是单端定位的，并且证明了PFM和电子传递黄素蛋白ETF的相互作用；发现了PA5471- 72基因间隔区对铜绿假单胞菌抗药性的影响；证明PA5017 基因参与了调控运动能力和生物被膜的功能，且发现rpoN 基因上调PA5017 基因的表达；利用microarray技术分析了四个新基因突变所导致的表达谱的变化；设计了42个用于临床检测的基因芯片和蛋白芯片的分子标记；设计了针对阻断铜绿假单胞菌感染的2种反义寡核苷酸抗菌药物。取得成果：在GenBank登录自主发现与铜绿假单胞杆菌病原性相关的未知功能的基因10个，发表论文7篇，申请专利6项，培养人才2人。效益与影响：本项目建立了高效的pKMF41-Mu转座分析方法，筛选到大量与病原性、抗药性相关的新基因。经过遗传互补，酵母双杂交分析，报告基因融合以及rtPCR等实验手段，揭示了众多基因的功能，并且以这些基因为靶点，设计了临床检测的芯片和靶向治疗的核酸药物。这些成果对于解决铜绿假单胞菌的难治性感染具有重要的理论意义和实际应用价值。

　　常见多重耐药的铜绿假单胞菌是临床上较为棘手的致病菌，研究其致病性相关功能基因具有重要意义。项目组构建铜绿假单胞菌pKMF41-Mu转座突变文库，筛选鉴定47个致病性和耐药性相关新基因；应用绿色荧光蛋白融合示踪技术证明了鞭毛运动相关基因pfm的表达产物在胞内是单端定位的，并且证明了PFM和电子传递黄素蛋白ETF的相互作用；发现了PA5471- 72基因间隔区对铜绿假单胞菌抗药性的影响；证明PA5017 基因参与了调控运动能力和生物被膜的功能，且发现rpoN 基因上调PA5017 基因的表达；利用microarray技术分析了四个新基因突变所导致的表达谱的变化；设计了42个用于临床检测的基因芯片和蛋白芯片的分子标记；设计了针对阻断铜绿假单胞菌感染的2种反义寡核苷酸抗菌药物。取得成果：在GenBank登录自主发现与铜绿假单胞杆菌病原性相关的未知功能的基因10个，发表论文7篇，申请专利6项，培养人才2人。效益与影响：本项目建立了高效的pKMF41-Mu转座分析方法，筛选到大量与病原性、抗药性相关的新基因。经过遗传互补，酵母双杂交分析，报告基因融合以及rtPCR等实验手段，揭示了众多基因的功能，并且以这些基因为靶点，设计了临床检测的芯片和靶向治疗的核酸药物。这些成果对于解决铜绿假单胞菌的难治性感染具有重要的理论意义和实际应用价值。