Epstein-Barr病毒(EBV)属DNA致肿瘤病毒，鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma，NPC)是EB病毒相关的一种常见的非淋巴细胞恶性肿瘤，易发生远距离和淋巴结转移，不能手术治疗，因此早期诊断和免疫治疗显得格外重要。树突状细胞(dendritic cell，DC)在机体识别肿瘤抗原及激发特异性抗肿瘤的细胞免疫中起重要作用。 　　本研究是涉及到病毒学、免疫学和分子生物学多学科交叉的前沿课题，难度较大，但基础较好，研究队伍力量较强。早在90年代中期在国内首先建立了高效、简便、富含多种细胞因子的DC培养系统，诱导人外周血单核细胞来源的DCs，在体外获得大量成熟的DCs，并对DC作了正负调节两方面的研究，为本课题的研究提供了保证。 　　本项目以DC为抗原递呈细胞（APC），选用EBV潜伏膜蛋白2A（LMP2A）为靶抗原，运用分子生物学、转基因方法，用RT-PCR成功克隆出EB病毒B95.8原型株LMP2A的cDNA，测序结果与原型株完全一致。成功构建EBV-LMP2A基因重组腺病毒和痘苗病毒载体，转染成熟DCs，激发特异性CTL，对EBV转染的靶细胞有杀伤效应，两个载体安全有效。同时在体内外对特异性CTL的免疫学功能作了较全面研究。 　　创新点： 　　1、首次在国内外选用EBV-LMP2A为靶抗原，以DC作为NPC免疫治疗的APC，构建重组痘苗病毒及腺病毒载体，转染DC，在体内外诱导特异性CTL，并对其功能作了全面研究； 　　2、首次建立了EBV-LMP2A重组腺病毒转染DC治疗小鼠移植瘤动物模型； 　　3、首次建立了EBV-LMP2A特异性CTL回输过继治疗荷瘤裸鼠的模型； 　　4、构建了含EBV-LMP2A毕氏酵母表达载体及LMP2A胞外区重组片段的原核表达系统，用于EB病毒相关肿瘤的检测，采用ELISA法显示特异性强，已和江阴力博医药生物技术有限公司共同开发研制试剂盒； 　　5、采用生物信息学预测并筛选鉴定了3条LMP2A特异性CTL多肽表位，其中QLS为国际首次鉴定，已申报专利。合成的肽用ELISPOT技术评估其在NPC患者和EBV携带者均可有效刺激免疫应答； 　　6、首次建立了LMP2A多肽特异性T细胞克隆，有助于阐明T细胞在控制EBV感染中的作用及其他相关肿瘤的免疫治疗提供证据； 　　7、用HLA-Ⅰ类分子限制的LMP2A抗原肽与HSP70体外混合刺激PBMC，激发特异性CTL，提高多肽苗交叉提呈效应； 　　8、首次用LMP2A为靶抗原激发NPC患者CTL再回输，与南京得康生物技术公司合作，共治疗NPC患者8例，目前正跟踪观察，并获得专利一项。 　　本研究以DC疫苗诱导特异性CTL，从体内到体外，从小鼠移植瘤到裸鼠模型的建立，并在伦理学通过，患者自愿，医生严密观察下用于8例晚期鼻咽癌患者的临床治疗。目前病人都存活很好。为临床用DC疫苗治疗鼻咽癌提供了理论依据和较成熟的技术。 　　在研期间发表论文31篇，其中SCI 9篇（2008年前5篇，2009年4篇），被国人引用96次，SCI引用11次。获得的体外扩增DC的成果已被应用于自身免疫病和乙型肝炎治疗性疫苗的研究，并发表SCI文章2篇。该课题培养博士6名，硕士7名，申报专利2项（已批准1项）。经查新证明研究一直处于该领域前沿，研究水平处于国内外研究同类先进水平。

　　Epstein-Barr病毒(EBV)属DNA致肿瘤病毒，鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma，NPC)是EB病毒相关的一种常见的非淋巴细胞恶性肿瘤，易发生远距离和淋巴结转移，不能手术治疗，因此早期诊断和免疫治疗显得格外重要。树突状细胞(dendritic cell，DC)在机体识别肿瘤抗原及激发特异性抗肿瘤的细胞免疫中起重要作用。 　　本研究是涉及到病毒学、免疫学和分子生物学多学科交叉的前沿课题，难度较大，但基础较好，研究队伍力量较强。早在90年代中期在国内首先建立了高效、简便、富含多种细胞因子的DC培养系统，诱导人外周血单核细胞来源的DCs，在体外获得大量成熟的DCs，并对DC作了正负调节两方面的研究，为本课题的研究提供了保证。 　　本项目以DC为抗原递呈细胞（APC），选用EBV潜伏膜蛋白2A（LMP2A）为靶抗原，运用分子生物学、转基因方法，用RT-PCR成功克隆出EB病毒B95.8原型株LMP2A的cDNA，测序结果与原型株完全一致。成功构建EBV-LMP2A基因重组腺病毒和痘苗病毒载体，转染成熟DCs，激发特异性CTL，对EBV转染的靶细胞有杀伤效应，两个载体安全有效。同时在体内外对特异性CTL的免疫学功能作了较全面研究。 　　创新点： 　　1、首次在国内外选用EBV-LMP2A为靶抗原，以DC作为NPC免疫治疗的APC，构建重组痘苗病毒及腺病毒载体，转染DC，在体内外诱导特异性CTL，并对其功能作了全面研究； 　　2、首次建立了EBV-LMP2A重组腺病毒转染DC治疗小鼠移植瘤动物模型； 　　3、首次建立了EBV-LMP2A特异性CTL回输过继治疗荷瘤裸鼠的模型； 　　4、构建了含EBV-LMP2A毕氏酵母表达载体及LMP2A胞外区重组片段的原核表达系统，用于EB病毒相关肿瘤的检测，采用ELISA法显示特异性强，已和江阴力博医药生物技术有限公司共同开发研制试剂盒； 　　5、采用生物信息学预测并筛选鉴定了3条LMP2A特异性CTL多肽表位，其中QLS为国际首次鉴定，已申报专利。合成的肽用ELISPOT技术评估其在NPC患者和EBV携带者均可有效刺激免疫应答； 　　6、首次建立了LMP2A多肽特异性T细胞克隆，有助于阐明T细胞在控制EBV感染中的作用及其他相关肿瘤的免疫治疗提供证据； 　　7、用HLA-Ⅰ类分子限制的LMP2A抗原肽与HSP70体外混合刺激PBMC，激发特异性CTL，提高多肽苗交叉提呈效应； 　　8、首次用LMP2A为靶抗原激发NPC患者CTL再回输，与南京得康生物技术公司合作，共治疗NPC患者8例，目前正跟踪观察，并获得专利一项。 　　本研究以DC疫苗诱导特异性CTL，从体内到体外，从小鼠移植瘤到裸鼠模型的建立，并在伦理学通过，患者自愿，医生严密观察下用于8例晚期鼻咽癌患者的临床治疗。目前病人都存活很好。为临床用DC疫苗治疗鼻咽癌提供了理论依据和较成熟的技术。 　　在研期间发表论文31篇，其中SCI 9篇（2008年前5篇，2009年4篇），被国人引用96次，SCI引用11次。获得的体外扩增DC的成果已被应用于自身免疫病和乙型肝炎治疗性疫苗的研究，并发表SCI文章2篇。该课题培养博士6名，硕士7名，申报专利2项（已批准1项）。经查新证明研究一直处于该领域前沿，研究水平处于国内外研究同类先进水平。