项目来源：“二黄糖肾康合糖适平对糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡的影响”为河北省中医药管理局计划项目（编号05046）。 学科（专业）：中西医结合基础。 1、立题背景 糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病常见的严重并发症，也是造成糖尿病患者死亡的主要原因之一。而糖尿病肾病目前单纯用西药和中药疗效均不理想，难以有效控制病情发展。我们在著名肾病专家赵玉庸的指导下，对糖尿病肾病的病机提出“脾肾亏虚，浊毒瘀血阻滞肾络”学说，即先有脾气亏虚，脾不散精，日久及肾，脾肾两虚，湿毒不化，瘀阻滞肾络，肾失封藏。在此基础上提出二黄糖肾康组方（由中药黄芪、大黄、党参、桑寄生、水蛭、茯苓、鬼箭羽等组成），有益气活血、降浊通络、补益脾肾的功能。 2、研究方法 2.1分组 本研究采用SD大鼠单侧肾切除加腹腔注射链脲佐菌素复制糖尿病肾病模型，随机分为模型组，二黄糖肾康低剂量组、高剂量组，贝那普利组，加假手术组共五组。二黄糖肾康低剂量组、二黄糖肾康高剂量组、贝那普利组上午均给糖适平5mg/kg体重，灌胃。下午，二黄糖肾康低剂量组用每毫升含生药1.8g/mL 灌胃，高剂量组用用每毫升含生药3.6g/mL灌胃，贝那普利组用等量蒸馏水溶解贝那普利1.7mg/kg，灌胃，本实验共8周。 2.2观察指标 血、尿生化指标：血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、血糖（GLU）、尿蛋白（Upro）、胰岛素（INS）；流式细胞术检测肾皮质细胞凋亡：细胞周期、细胞凋亡率与凋亡蛋白Fas、Fas-L、Bax、Bcl-2相对含量检测；原位末端标记法检测肾皮质细胞凋亡；Western 印迹方法检测细胞内磷酸化Akt蛋白质的表达；光镜肾组织检测等。 3、研究结果 3.1血、尿生化指标 BUN、Scr、Upro，二黄糖肾康高、低剂量组均明显低于贝那普利组（P＜0.01或P＜0.05）。 3.2流式细胞术检测肾皮质细胞凋亡 ①细胞凋亡数目：各治疗组细胞凋亡数目明显低于模型组（P＜0.01），二黄糖肾康高剂量组细胞凋亡数目与贝那普利组有显著差别（P＜0.05）。 ②细胞凋亡周期：低剂量、高剂量二黄糖肾康对DN大鼠的肾脏细胞周期有影响，能够明显延长G1/ G0期，缩短S期，降低细胞增殖（P＜0.01），二黄糖肾康高剂量组较贝那普利组能降低细胞增殖（P＜0.05）。 ③对调控蛋白Bax和Bcl-2表达的定量检测：二黄糖肾康高剂量组能明显上调Bcl-2表达，而降低Bax表达（P＜0.01），贝那普利组和二黄糖肾康低剂量组对模型组的Bax和Bcl-2表达亦有影响（P＜0.05）。 ④对肾脏细胞凋亡调控蛋白Fas及Fas-L表达的定量检测：二黄糖肾康可下调Fas及Fas-L表达。二黄糖肾康低剂量组、高剂量组与贝那普利组相比，差异显著（p＜0.05，P＜0.01）；二黄糖肾康低剂量组与高剂量组相比，亦有明显差异（p＜0.01）。 3.3原位末端标记法（TUNEL）检测肾皮质细胞凋亡 贝那普利组、二黄糖肾康低剂量组、高剂量组与模型组比较，均能明显降低肾小球及肾小管内细胞凋亡指数（P＜0.01）；二黄糖肾康高剂量组与贝那普利组比较在降低肾小管凋亡指数方面有显著差异（P＜0.05）。 3.4对肾皮质细胞Akt，p-Akt 表达的影响 贝那普利组、二黄糖肾康低剂量组、高剂量组在p-Akt 表达上与模型组、假手术组相比明显升高（p＜0.01）。二黄糖肾康高剂量组在p-Akt 表达上与低剂量组、贝那普利组相比明显升高（p＜0.01）。 3.5光镜检测肾组织形态：经定量分析，二黄糖肾康高剂量组、低剂量组、贝那普利组皆能在一定程度上改善系膜增生以及动脉病变的程度（P＜0.05）；二黄糖肾康低剂量组与高剂量组相比较虽无显著性差异（p＞0.05），但其系膜增生的趋势要高。 总之，二黄糖肾康合糖适平能够降低尿素氮、血肌酐、血糖及尿蛋白；增强胰岛素生物活性，改善胰岛素抵抗，增加机体对胰岛素的敏感性；减少肾脏细胞凋亡的数目；干预细胞周期G0/G1期和S期，降低PI，从而减少细胞的过度增殖；上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的相对表达，并下调Bax、Fas及Fas-L的相对表达，激活PI3 K/AKT信号通路，从而干预肾组织细胞凋亡，保护肾脏。 4、结论 二黄糖肾康合用糖适平治疗糖尿病肾病优于单纯西药治疗。

项目来源：“二黄糖肾康合糖适平对糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡的影响”为河北省中医药管理局计划项目（编号05046）。 学科（专业）：中西医结合基础。 1、立题背景 糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病常见的严重并发症，也是造成糖尿病患者死亡的主要原因之一。而糖尿病肾病目前单纯用西药和中药疗效均不理想，难以有效控制病情发展。我们在著名肾病专家赵玉庸的指导下，对糖尿病肾病的病机提出“脾肾亏虚，浊毒瘀血阻滞肾络”学说，即先有脾气亏虚，脾不散精，日久及肾，脾肾两虚，湿毒不化，瘀阻滞肾络，肾失封藏。在此基础上提出二黄糖肾康组方（由中药黄芪、大黄、党参、桑寄生、水蛭、茯苓、鬼箭羽等组成），有益气活血、降浊通络、补益脾肾的功能。 2、研究方法 2.1分组 本研究采用SD大鼠单侧肾切除加腹腔注射链脲佐菌素复制糖尿病肾病模型，随机分为模型组，二黄糖肾康低剂量组、高剂量组，贝那普利组，加假手术组共五组。二黄糖肾康低剂量组、二黄糖肾康高剂量组、贝那普利组上午均给糖适平5mg/kg体重，灌胃。下午，二黄糖肾康低剂量组用每毫升含生药1.8g/mL 灌胃，高剂量组用用每毫升含生药3.6g/mL灌胃，贝那普利组用等量蒸馏水溶解贝那普利1.7mg/kg，灌胃，本实验共8周。 2.2观察指标 血、尿生化指标：血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、血糖（GLU）、尿蛋白（Upro）、胰岛素（INS）；流式细胞术检测肾皮质细胞凋亡：细胞周期、细胞凋亡率与凋亡蛋白Fas、Fas-L、Bax、Bcl-2相对含量检测；原位末端标记法检测肾皮质细胞凋亡；Western 印迹方法检测细胞内磷酸化Akt蛋白质的表达；光镜肾组织检测等。 3、研究结果 3.1血、尿生化指标 BUN、Scr、Upro，二黄糖肾康高、低剂量组均明显低于贝那普利组（P＜0.01或P＜0.05）。 3.2流式细胞术检测肾皮质细胞凋亡 ①细胞凋亡数目：各治疗组细胞凋亡数目明显低于模型组（P＜0.01），二黄糖肾康高剂量组细胞凋亡数目与贝那普利组有显著差别（P＜0.05）。 ②细胞凋亡周期：低剂量、高剂量二黄糖肾康对DN大鼠的肾脏细胞周期有影响，能够明显延长G1/ G0期，缩短S期，降低细胞增殖（P＜0.01），二黄糖肾康高剂量组较贝那普利组能降低细胞增殖（P＜0.05）。 ③对调控蛋白Bax和Bcl-2表达的定量检测：二黄糖肾康高剂量组能明显上调Bcl-2表达，而降低Bax表达（P＜0.01），贝那普利组和二黄糖肾康低剂量组对模型组的Bax和Bcl-2表达亦有影响（P＜0.05）。 ④对肾脏细胞凋亡调控蛋白Fas及Fas-L表达的定量检测：二黄糖肾康可下调Fas及Fas-L表达。二黄糖肾康低剂量组、高剂量组与贝那普利组相比，差异显著（p＜0.05，P＜0.01）；二黄糖肾康低剂量组与高剂量组相比，亦有明显差异（p＜0.01）。 3.3原位末端标记法（TUNEL）检测肾皮质细胞凋亡 贝那普利组、二黄糖肾康低剂量组、高剂量组与模型组比较，均能明显降低肾小球及肾小管内细胞凋亡指数（P＜0.01）；二黄糖肾康高剂量组与贝那普利组比较在降低肾小管凋亡指数方面有显著差异（P＜0.05）。 3.4对肾皮质细胞Akt，p-Akt 表达的影响 贝那普利组、二黄糖肾康低剂量组、高剂量组在p-Akt 表达上与模型组、假手术组相比明显升高（p＜0.01）。二黄糖肾康高剂量组在p-Akt 表达上与低剂量组、贝那普利组相比明显升高（p＜0.01）。 3.5光镜检测肾组织形态：经定量分析，二黄糖肾康高剂量组、低剂量组、贝那普利组皆能在一定程度上改善系膜增生以及动脉病变的程度（P＜0.05）；二黄糖肾康低剂量组与高剂量组相比较虽无显著性差异（p＞0.05），但其系膜增生的趋势要高。 总之，二黄糖肾康合糖适平能够降低尿素氮、血肌酐、血糖及尿蛋白；增强胰岛素生物活性，改善胰岛素抵抗，增加机体对胰岛素的敏感性；减少肾脏细胞凋亡的数目；干预细胞周期G0/G1期和S期，降低PI，从而减少细胞的过度增殖；上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的相对表达，并下调Bax、Fas及Fas-L的相对表达，激活PI3 K/AKT信号通路，从而干预肾组织细胞凋亡，保护肾脏。 4、结论 二黄糖肾康合用糖适平治疗糖尿病肾病优于单纯西药治疗。