1、简要技术说明 　　1.1牛结核抗体ELISA技术 　　牛分枝杆菌具有多种免疫原性蛋白，能诱导感染动物产生特异性抗体。但牛分枝杆菌在不同感染时期表达的蛋白谱不同。本成果将四种牛分枝杆菌特异性抗原MPB70/MPB83/ESAT6/CFP10融合表达，用作诊断抗原，辣根过氧化物酶标记的羊抗牛作为检测抗体，建立牛结核抗体间接ELISA，用于高通量快速检测奶牛、黄牛、梅花鹿牛结核血清抗体。 　　1.2牛结核抗体胶体金试纸条诊断技术 　　将牛分枝杆菌特异性抗原MPB83用胶体金标记，MPB70包被在硝酸纤维素膜上，利用MPB83和MPB70的抗原交叉性，建立了检测牛型分枝杆菌血清抗体的双抗原夹心胶体金免疫层析方法，可用于奶牛、黄牛和梅花鹿等不同动物的牛结核快速诊断。 　　1.3结核IFN-δ诊断法 　　克隆表达人、牛与梅花鹿的IFN-γ，制备IFN-γ的单克隆抗体，用兔体制备IFN-γ多克隆抗体，分别纯化IFN-γ单克隆抗体与多克隆抗体，用单克隆抗体包被ELISA板作为IFN-γ捕获抗体，兔抗IFN-γ多克隆抗体作为检测抗体，建立并标化检测IFN-γ的夹心ELISA。采用自制重组蛋白ESAT-6/CFP-10（CE）或ESAT-6/CFP-10/RV3872（CER）为刺激抗原，刺激人或动物外周血释放IFN-γ，用所建方法进行检测。用于结核早期准确诊断。 　　2、应用前景 　　现有的结核菌素皮内变态反应作为检测结核的经典方法，越来越被认为存在特异性和敏感性不高的问题。传统检测方法无法对结核个体进行有效检测，细菌分离方法又繁琐费时，且对仪器设施要求严格，亦不适于临床应用。因此，急需要一种特异性、敏感性都较高的检测方法应用于临床的检测。本研究所建立的牛结核新型检测方法，只需一次性保定牛与采血，或“栏圈旁”检测，或实验室高通量检测，简便、快速、省时省力，对早期快速诊断牛结核感染、保障动物健康和人类健康具有重要意义。而人结核新型诊断试剂能方便快捷地检出早期结核病例，为非结核专科医院提供了很大方便。 　　总之，所研发产品对人类公共卫生安全的意义十分重大，社会效益显著，具有广阔的推广应用前景。目前本项目成果已在更大范围的进行人结核和牛结核及梅花鹿结核检测的临床应用评价。

　　1、简要技术说明 　　1.1牛结核抗体ELISA技术 　　牛分枝杆菌具有多种免疫原性蛋白，能诱导感染动物产生特异性抗体。但牛分枝杆菌在不同感染时期表达的蛋白谱不同。本成果将四种牛分枝杆菌特异性抗原MPB70/MPB83/ESAT6/CFP10融合表达，用作诊断抗原，辣根过氧化物酶标记的羊抗牛作为检测抗体，建立牛结核抗体间接ELISA，用于高通量快速检测奶牛、黄牛、梅花鹿牛结核血清抗体。 　　1.2牛结核抗体胶体金试纸条诊断技术 　　将牛分枝杆菌特异性抗原MPB83用胶体金标记，MPB70包被在硝酸纤维素膜上，利用MPB83和MPB70的抗原交叉性，建立了检测牛型分枝杆菌血清抗体的双抗原夹心胶体金免疫层析方法，可用于奶牛、黄牛和梅花鹿等不同动物的牛结核快速诊断。 　　1.3结核IFN-δ诊断法 　　克隆表达人、牛与梅花鹿的IFN-γ，制备IFN-γ的单克隆抗体，用兔体制备IFN-γ多克隆抗体，分别纯化IFN-γ单克隆抗体与多克隆抗体，用单克隆抗体包被ELISA板作为IFN-γ捕获抗体，兔抗IFN-γ多克隆抗体作为检测抗体，建立并标化检测IFN-γ的夹心ELISA。采用自制重组蛋白ESAT-6/CFP-10（CE）或ESAT-6/CFP-10/RV3872（CER）为刺激抗原，刺激人或动物外周血释放IFN-γ，用所建方法进行检测。用于结核早期准确诊断。 　　2、应用前景 　　现有的结核菌素皮内变态反应作为检测结核的经典方法，越来越被认为存在特异性和敏感性不高的问题。传统检测方法无法对结核个体进行有效检测，细菌分离方法又繁琐费时，且对仪器设施要求严格，亦不适于临床应用。因此，急需要一种特异性、敏感性都较高的检测方法应用于临床的检测。本研究所建立的牛结核新型检测方法，只需一次性保定牛与采血，或“栏圈旁”检测，或实验室高通量检测，简便、快速、省时省力，对早期快速诊断牛结核感染、保障动物健康和人类健康具有重要意义。而人结核新型诊断试剂能方便快捷地检出早期结核病例，为非结核专科医院提供了很大方便。 　　总之，所研发产品对人类公共卫生安全的意义十分重大，社会效益显著，具有广阔的推广应用前景。目前本项目成果已在更大范围的进行人结核和牛结核及梅花鹿结核检测的临床应用评价。