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多重PCR检测耐甲氧西林葡萄球菌方法的建立与应用

成果基本信息
关键词: 耐药甲氧西林;葡萄球菌;多重PCR
成果类别: 应用技术 技术成熟度: 初期阶段
体现形式(基础理论类): / 体现形式(应用技术类): 新技术
成果登记号: 青科鉴字2010第577号 资源采集日期: 11-2-20
研究情况
单位名称: 青岛市中心医院 技术水平: 国内领先
评价证书号: 2010577 评价单位: 青岛市科技局
评价日期: 2010.10.29 评价证书号: 2010577
转化情况
转让范围: 限国内转让 推广形式: 1;4
已转让企业数(个): 0
联系方式
联系人(平台): 孵化基地 联系人(平台)电话: 0771-3394012
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成果简介

  采用多重PCR技术检测葡萄球菌的16srRNA、mecA基因与femA基因,直接筛检MRS。以广泛存在于葡萄球菌中的16SrRNA基因片段作为扩增的内参照,只有当该基因片断被扩增出,而靶基因片断未被扩增出时,才能断定待测菌不携带靶基因,而当两者均未扩增出时,说明扩增失败,需要重复试验,不能说明待测菌不携带靶基因,这样就避免了假阴性的出现。试验中曾出现2株菌16SrRNA和mecA扩增产物阴性,重复试验后证实两者均为阳性,如不设16SrRNA基因片断作内部参照物,就会漏掉这两株携带mecA的葡萄球菌。   我们以mecA基因阳性来诊断MRS,其敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为100%、96.6%、100%、99.0%,以mecA基因和femA基因阳性作为判断MRSA的指标,则敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为100%、99.5%、100%、98.5%。其中,两例琼脂稀释法阴性而mecA基因阳性的菌株,一株同时培养出大量的铜绿假单孢菌,再经过高选择性的培养基(mannitolsalt-agar)培养,也分离出了MRSA;另一株在随后经过持续性地培养,同样证明为MRS。采用多重PCR技术可在同一系统内快速鉴定标本中携带的葡萄球菌16SrRNA基因、mecA基因和femA基因,而整个过程只需6h。因此多重PCR检测MRS具快速、敏感、特异性强的优点,能及时提示临床使用糖肽类抗生素,迅速控制耐甲氧西林葡萄球菌造成的感染,限制其播散。   本研究还探讨了社区获得和医院获得性金黄色葡萄球菌在耐药性和流行趋势方面的异同,通过数据分析,医院获得性感染和社区获得性感染MRSA的检出率不同,医院感染要高于社区感染,并且医院感染主要来自呼吸科、ICU和神经科,而社区获得性感染主要来自皮肤科和泌尿科,这与这些科室的病人的药物的选择性压力有关。尤其是社区获得性病人中的皮肤科和泌尿科的病人,滥服抗生素的现象比较严重,且应用极不规范,导致耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌的出现。   金黄色葡萄球菌由于产生β-内酰胺酶及独特型青霉素结合蛋白(PBP2a),致使β-内酰胺类药物耐药率特别高,青霉素和头孢类抗菌药物的耐药率均超过90%,医院获得性和社区获得性感染之间没有显著差异;对利奈唑胺和万古霉素,均未发现有耐药菌株,医院获得性和社区获得性感染之间也没有没有显著差异;医院获得性金黄色葡萄球菌较社区获得性金黄色葡萄球菌在阿莫西林/棒酸、头孢唑林、苯唑西林、左氧氟沙星、哌拉西林/舒巴坦、利福平、奎奴普丁等药物的耐药性高,且存在多重耐药。为临床用药提供了可靠依据。

成果名称: 多重PCR检测耐甲氧西林葡萄球菌方法的建立与应用 关键词: 耐药甲氧西林;葡萄球菌;多重PCR
成果类别: 应用技术 一级分类名称: 医学生物工程
二级分类名称: / 三级分类名称: /
研究起止时间: 2005.07 至2007.07 成果体现形式(应用技术类): 新技术
成果属性: 国外引进消化吸收创新 成果体现形式(基础理论类): /
技术成熟度: 初期阶段 技术水平: 国内领先
研究形式: 独立研究 学科分类1: 320.11
单位名称: 青岛市中心医院 学科分类2: /
中图分类号1: R446.5 所属高新技术类别: 生物、医药和医疗器械
中图分类号2: / 课题来源: 国家科技计划
应用行业: 卫生、社会保障和社会福利业 课题立项名称:
国家科技计划子类别: 基础研究计划 课题立项编号: 2005-wszd043
经费实际投入额 (万元): 0 评价单位: 青岛市科技局
评价形式: 鉴定 应用状态: 稳定应用
评价日期: 2010.10.29 转让范围: 限国内转让
评价证书号: 2010577 推荐单位: /
推广形式: 1;4 成果登记号: 青科鉴字2010第577号
成果简介:

  采用多重PCR技术检测葡萄球菌的16srRNA、mecA基因与femA基因,直接筛检MRS。以广泛存在于葡萄球菌中的16SrRNA基因片段作为扩增的内参照,只有当该基因片断被扩增出,而靶基因片断未被扩增出时,才能断定待测菌不携带靶基因,而当两者均未扩增出时,说明扩增失败,需要重复试验,不能说明待测菌不携带靶基因,这样就避免了假阴性的出现。试验中曾出现2株菌16SrRNA和mecA扩增产物阴性,重复试验后证实两者均为阳性,如不设16SrRNA基因片断作内部参照物,就会漏掉这两株携带mecA的葡萄球菌。   我们以mecA基因阳性来诊断MRS,其敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为100%、96.6%、100%、99.0%,以mecA基因和femA基因阳性作为判断MRSA的指标,则敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为100%、99.5%、100%、98.5%。其中,两例琼脂稀释法阴性而mecA基因阳性的菌株,一株同时培养出大量的铜绿假单孢菌,再经过高选择性的培养基(mannitolsalt-agar)培养,也分离出了MRSA;另一株在随后经过持续性地培养,同样证明为MRS。采用多重PCR技术可在同一系统内快速鉴定标本中携带的葡萄球菌16SrRNA基因、mecA基因和femA基因,而整个过程只需6h。因此多重PCR检测MRS具快速、敏感、特异性强的优点,能及时提示临床使用糖肽类抗生素,迅速控制耐甲氧西林葡萄球菌造成的感染,限制其播散。   本研究还探讨了社区获得和医院获得性金黄色葡萄球菌在耐药性和流行趋势方面的异同,通过数据分析,医院获得性感染和社区获得性感染MRSA的检出率不同,医院感染要高于社区感染,并且医院感染主要来自呼吸科、ICU和神经科,而社区获得性感染主要来自皮肤科和泌尿科,这与这些科室的病人的药物的选择性压力有关。尤其是社区获得性病人中的皮肤科和泌尿科的病人,滥服抗生素的现象比较严重,且应用极不规范,导致耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌的出现。   金黄色葡萄球菌由于产生β-内酰胺酶及独特型青霉素结合蛋白(PBP2a),致使β-内酰胺类药物耐药率特别高,青霉素和头孢类抗菌药物的耐药率均超过90%,医院获得性和社区获得性感染之间没有显著差异;对利奈唑胺和万古霉素,均未发现有耐药菌株,医院获得性和社区获得性感染之间也没有没有显著差异;医院获得性金黄色葡萄球菌较社区获得性金黄色葡萄球菌在阿莫西林/棒酸、头孢唑林、苯唑西林、左氧氟沙星、哌拉西林/舒巴坦、利福平、奎奴普丁等药物的耐药性高,且存在多重耐药。为临床用药提供了可靠依据。

联系人: 青岛市卫生局 成果登记日期: 10-11-10
联系人email: / 单位代码: 93701763
邮政编码222: 266042 联系人电话: 0532-85912516
单位传真: 053284863506 单位通讯地址: 青岛市四方区四流南路127号
单位所在省市: 山东省 单位电话: 0532-84855192
转让收入(万元): 0 单位属性: 医疗机构
合作完成单位: / 已转让企业数(个): 0
成果发布年份: 2010 知识产权形式:
成果完成人: 牟晓峰;黄卫青;赵自云;江秀爱;程绍云 资源采集日期: 11-2-20

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