本研究为2006年浙江省医药卫生立项课题。我们国家及世界各地自2003年出现新发传染病SARS以来，传染性疾病的防治工作面临着新的形势，加强新发传染病等防治技术的研究与应用，对于保证我国人民健康、社会稳定、经济发展和国家安全具有重要意义。因此，国家重点开展各种传染病的快速筛查、检测等方法和技术的研究。血清学方法是通过检测人体血清中的病毒特异性抗体，来判断病人是否被病毒感染，一般发病1～2天就能检测出血清中IgM抗体，并且有较高的敏感性和特异性，且临床标本采集容易，安全度高，为实验室诊断病毒感染的主要方法之一，抗体检测还可广泛应用于人群血清流行病学研究。 　　本课题利用分子生物学技术，通过克隆病毒结构基因，在大肠杆菌中表达病毒蛋白，经亲和层析和离子交换等方法纯化表达蛋白，建立直接将辣根过氧化物酶标记在表达的相关病毒抗原并研究开发检测试剂的技术平台。已成功开发了以汉坦病毒（HV）N蛋白为代表的IgM直接捕捉ELISA检测方法。该方法减少酶反应体系中的一个环节，达到特异性更高，操作更简便，克服传统抗体酶标记技术中试剂非特异反应多，操作步骤繁琐等缺点。 　　本课题的主要成果及应用情况： 　　（1）成功开发汉坦病毒（HV）N蛋白IgM直接捕捉ELISA技术：从HV代表株Z10毒株基因组克隆了S基因编码区并构建了核蛋白（NP）原核表达系统，以提纯的重组NP（rNP）为抗原，直接将辣根过氧化物酶（HRP）标记在纯化的核蛋白上，成功制备了用于ELISA检测的酶标抗原HRP-rNP，建立了汉坦病毒（HV）N蛋白IgM直接捕捉ELISA检测方法。利用该方法(测IgM)和间接免疫荧光法(测IgG)同时检测169例出血热疑似病人急性期和恢复期双份血清，结果首份血清阳性符合率97.56﹪，第2份血清符合率100﹪；利用该方法和康华生物公司产品同时检测296份出血热IgM抗体，结果首份血清该方法253份阳性，康华产品238份阳性，阳性符合率94.0﹪，第2、第3份血清阳性符合率100﹪，说明该方法能使抗HV-IgM阳性结果的检出相对提前，其敏感性也更好。该方法检测抗水痘病毒-IgM、抗乙型脑炎病毒-IgM、抗登革热病毒-IgM、抗手足口EV71病毒-IgM阳性血清各10份，结果均为阴性，表明该方法敏感、特异、稳定。 　　（2）完成乙脑分离株和狂犬病毒疫苗株核蛋白基因的克隆及表达，表达的蛋白具有免疫反应性，可作为有效的诊断抗原，为进一步研制乙脑、狂犬病毒血清学诊断试剂盒的开发提供材料。 　　（3）该研究项目发表11篇论文（其中6篇为Medline收录）；成果在全国范围内举办培训班1次；检测方法在嘉兴、台州、丽水、杭州等地推广应用，经863份血清检测结果表明方法稳定、特异、敏感，可用于肾综合征出血热早期病人的诊断，具有非常显著的社会效益，同时具有良好的经济效益前景。

　　本研究为2006年浙江省医药卫生立项课题。我们国家及世界各地自2003年出现新发传染病SARS以来，传染性疾病的防治工作面临着新的形势，加强新发传染病等防治技术的研究与应用，对于保证我国人民健康、社会稳定、经济发展和国家安全具有重要意义。因此，国家重点开展各种传染病的快速筛查、检测等方法和技术的研究。血清学方法是通过检测人体血清中的病毒特异性抗体，来判断病人是否被病毒感染，一般发病1～2天就能检测出血清中IgM抗体，并且有较高的敏感性和特异性，且临床标本采集容易，安全度高，为实验室诊断病毒感染的主要方法之一，抗体检测还可广泛应用于人群血清流行病学研究。 　　本课题利用分子生物学技术，通过克隆病毒结构基因，在大肠杆菌中表达病毒蛋白，经亲和层析和离子交换等方法纯化表达蛋白，建立直接将辣根过氧化物酶标记在表达的相关病毒抗原并研究开发检测试剂的技术平台。已成功开发了以汉坦病毒（HV）N蛋白为代表的IgM直接捕捉ELISA检测方法。该方法减少酶反应体系中的一个环节，达到特异性更高，操作更简便，克服传统抗体酶标记技术中试剂非特异反应多，操作步骤繁琐等缺点。 　　本课题的主要成果及应用情况： 　　（1）成功开发汉坦病毒（HV）N蛋白IgM直接捕捉ELISA技术：从HV代表株Z10毒株基因组克隆了S基因编码区并构建了核蛋白（NP）原核表达系统，以提纯的重组NP（rNP）为抗原，直接将辣根过氧化物酶（HRP）标记在纯化的核蛋白上，成功制备了用于ELISA检测的酶标抗原HRP-rNP，建立了汉坦病毒（HV）N蛋白IgM直接捕捉ELISA检测方法。利用该方法(测IgM)和间接免疫荧光法(测IgG)同时检测169例出血热疑似病人急性期和恢复期双份血清，结果首份血清阳性符合率97.56﹪，第2份血清符合率100﹪；利用该方法和康华生物公司产品同时检测296份出血热IgM抗体，结果首份血清该方法253份阳性，康华产品238份阳性，阳性符合率94.0﹪，第2、第3份血清阳性符合率100﹪，说明该方法能使抗HV-IgM阳性结果的检出相对提前，其敏感性也更好。该方法检测抗水痘病毒-IgM、抗乙型脑炎病毒-IgM、抗登革热病毒-IgM、抗手足口EV71病毒-IgM阳性血清各10份，结果均为阴性，表明该方法敏感、特异、稳定。 　　（2）完成乙脑分离株和狂犬病毒疫苗株核蛋白基因的克隆及表达，表达的蛋白具有免疫反应性，可作为有效的诊断抗原，为进一步研制乙脑、狂犬病毒血清学诊断试剂盒的开发提供材料。 　　（3）该研究项目发表11篇论文（其中6篇为Medline收录）；成果在全国范围内举办培训班1次；检测方法在嘉兴、台州、丽水、杭州等地推广应用，经863份血清检测结果表明方法稳定、特异、敏感，可用于肾综合征出血热早期病人的诊断，具有非常显著的社会效益，同时具有良好的经济效益前景。