一、课题来源与背景： 　　本课题由温州市科技局立项资助。IL-18，其成熟肽以单体形式发挥作用，主要生物学活性是诱导T细胞产生IFN-γ，促进Th1、NK细胞的增殖活化，发挥抗肿瘤作用，但其同时有负向炎症激发作用，大量应用容易激发炎症反应，产生副作用。 　　因此，需要一种导向序列来加强IL-18的靶向性。我们首次构建EGF-IL-18（EGFR干扰序列-Linker-IL-18）融合蛋白，一种新的双特异性细胞因子，用于肿瘤靶向治疗。 　　二、研究目的与意义： 　　通过原核表达、中试发酵、纯化批量获取EGF-IL-18融合蛋白，证实其对肝癌等肿瘤的体内、外抗肿瘤效应，最终把EGF-IL-18蛋白开发成抗肿瘤生物药物。 　　三、主要论点： 　　EGF-IL-18蛋白既能与肿瘤细胞表面的EGFR结合，直接抑制肿瘤细胞的生长、转移等特性，又能与T细胞表面的IL-18R结合，刺激产生IFN-γ， IFN-γ进一步促进Th1、NK细胞的增殖活化，使其对肝癌等肿瘤发挥抗肿瘤作用。 　　主要论据：通过基因原核表达、微生物发酵、蛋白纯化等技术从大肠杆菌中成功表达重组人EGF-IL-18融合蛋白，并证实其具有较好的体内外抗肿瘤活性；采取正交试验设计，进一步优化补料、温度、转速等不同的发酵条件，完善实验室中试工艺，提高工程菌在发酵罐中的产量，发酵液菌体湿重为69.9g/L，包涵体为3.3g/L，经复性和纯化得到561mg/L的EGF-IL-18（纯度95%以上）。 　　四、创见与创新： 　　首次构建的EGF-IL-18融合蛋白已申请专利并进入实审，该蛋白具有双特异性，既能与肿瘤细胞表面的EGF受体结合，又能与效应细胞（NK细胞、CD4＋T细胞）表面的IL-18受体结合，在效应细胞与肿瘤细胞之间起“桥梁”作用，提高靶向性。通过中试发酵有效的提高了目的蛋白的产量，使之能满足产业化的需求。 　　五、社会经济效益： 　　该项目完成后为EGF-IL-18进入临床实验打下坚实基础，如若成功应用于临床，具有极大的社会经济效益：中国每年癌症患者400万人以上，以5%患者接受治疗计算，需要生产10000g，年产销售额达10亿元以上，采用中试发酵生产目的蛋白可节约节约水，电等成本近亿元。 　　六、存在的问题： 　　尚未完成新药申报工作，如进入临床试验阶段还存在一些未知因素。

　　一、课题来源与背景： 　　本课题由温州市科技局立项资助。IL-18，其成熟肽以单体形式发挥作用，主要生物学活性是诱导T细胞产生IFN-γ，促进Th1、NK细胞的增殖活化，发挥抗肿瘤作用，但其同时有负向炎症激发作用，大量应用容易激发炎症反应，产生副作用。 　　因此，需要一种导向序列来加强IL-18的靶向性。我们首次构建EGF-IL-18（EGFR干扰序列-Linker-IL-18）融合蛋白，一种新的双特异性细胞因子，用于肿瘤靶向治疗。 　　二、研究目的与意义： 　　通过原核表达、中试发酵、纯化批量获取EGF-IL-18融合蛋白，证实其对肝癌等肿瘤的体内、外抗肿瘤效应，最终把EGF-IL-18蛋白开发成抗肿瘤生物药物。 　　三、主要论点： 　　EGF-IL-18蛋白既能与肿瘤细胞表面的EGFR结合，直接抑制肿瘤细胞的生长、转移等特性，又能与T细胞表面的IL-18R结合，刺激产生IFN-γ， IFN-γ进一步促进Th1、NK细胞的增殖活化，使其对肝癌等肿瘤发挥抗肿瘤作用。 　　主要论据：通过基因原核表达、微生物发酵、蛋白纯化等技术从大肠杆菌中成功表达重组人EGF-IL-18融合蛋白，并证实其具有较好的体内外抗肿瘤活性；采取正交试验设计，进一步优化补料、温度、转速等不同的发酵条件，完善实验室中试工艺，提高工程菌在发酵罐中的产量，发酵液菌体湿重为69.9g/L，包涵体为3.3g/L，经复性和纯化得到561mg/L的EGF-IL-18（纯度95%以上）。 　　四、创见与创新： 　　首次构建的EGF-IL-18融合蛋白已申请专利并进入实审，该蛋白具有双特异性，既能与肿瘤细胞表面的EGF受体结合，又能与效应细胞（NK细胞、CD4＋T细胞）表面的IL-18受体结合，在效应细胞与肿瘤细胞之间起“桥梁”作用，提高靶向性。通过中试发酵有效的提高了目的蛋白的产量，使之能满足产业化的需求。 　　五、社会经济效益： 　　该项目完成后为EGF-IL-18进入临床实验打下坚实基础，如若成功应用于临床，具有极大的社会经济效益：中国每年癌症患者400万人以上，以5%患者接受治疗计算，需要生产10000g，年产销售额达10亿元以上，采用中试发酵生产目的蛋白可节约节约水，电等成本近亿元。 　　六、存在的问题： 　　尚未完成新药申报工作，如进入临床试验阶段还存在一些未知因素。