1、课题来源与背景 　　糖尿病（DM）是一种以血糖代谢紊乱为特点的常见的慢性疾病，是多因素的遗传性疾病，受遗传和环境因素影响，其发病率正逐年增高。近年来分子遗传学的研究表明，某些糖尿病具有遗传倾向，迄今已发现了多种基因与糖尿病的发病相关，其中以线粒体基因突变糖尿病最为常见。mtDNA序列中存在一些非编码序列，其中比较重要的是mtDNA复制的控制区（control region，displacement loop，D-Loop）占全部mtDNA的6%左右，位置在np16028-577bp，富含A-T碱基，遗传上是高突变区，mtDNA的重链和轻链复制起始点均位于此区内，主要是调控mtDNA的转录和复制。从理论而言：突变发生在D-Loop区，情况将比发生在编码区的情况严重的多，它将引起整个线粒体功能的紊乱，直接影响线粒体的功能，引起mtDNA复制速率的变化，这与线粒体功能的异常也是紧密相关的。 目前对T2DM在基因水平研究中主要集中在编码区，而对非编码区研究的较少；同时非编码区为一高变异区，对浙江汉族人群在该区域的变异情况报道较少。 　　2、技术原理及性能指标 　 ①随机收集浙江地区汉族人群中无血缘关系的199例被确诊为T2DM患者，详细记录每例患者的临床资料及主要生化指标，同时随机选取102例健康体检者（排除糖尿病、糖耐量异常、高血压等相关疾病）作为正常对照，两者其年龄、性别等指标无统计学差异（P＞0.05）； ②提取全血基因组DNA，用特定的针对整个mtDNA D-Loop基因区域的两对引物扩增出PCR产物并纯化； ③对PCR纯化产物直接测序分析； ④使用生物信息学软件（Gentle、Chromas等）进行与标准剑桥序列的比对分析，查找变异位点并进行相关分析。 　　3、技术的创造性与先进性 　　该课题设计合理，具有较强的创新性。虽先前已明确某些线粒体基因缺陷可导致T2DM的发生，但之前的研究大多集中在线粒体基因编码区，而线粒体基因非编码区尤其是基因复制的控制区（D-Loop区）的变异与糖尿病的关系研究较少。本课题通过研究线粒体基因在T2DM及其在家系遗传中的发生情况，掌握了浙江汉族人群T2DM患者mtDNA D-Loop区基因和剑桥标准序列之间的差异， 及其与各临床主要指标的相关性，为进一步研究T2DM的发病机理，及对其进行早期针对性治疗、预测和评估提供可能。 　　4、技术的成熟程度，适用范围和安全性 　　①分析浙江汉族人群2型糖尿病（T2DM）mtDNA D-Loop区基因和剑桥标准序列之间的差异，并筛查了与T2DM相关的突变位点； 　　②探讨mtDNA D-Loop区基因变异与T2DM主要临床指标及并发症的相关性，为T2DM的发生发展提供风险预报。 　　5、应用情况及存在的问题 　　通过本课题的研究，与临床相关的np73A-G、np263A-G位点的发现对以后研究中国浙江汉族人群的研究提供了可靠的参考依据，并全面地掌握了D-Loop基因区与2型糖尿病的发病及相关并发症之间的相关性，为以后糖尿病的基因诊断及治疗提供了很好的理论依据。

　　1、课题来源与背景 　　糖尿病（DM）是一种以血糖代谢紊乱为特点的常见的慢性疾病，是多因素的遗传性疾病，受遗传和环境因素影响，其发病率正逐年增高。近年来分子遗传学的研究表明，某些糖尿病具有遗传倾向，迄今已发现了多种基因与糖尿病的发病相关，其中以线粒体基因突变糖尿病最为常见。mtDNA序列中存在一些非编码序列，其中比较重要的是mtDNA复制的控制区（control region，displacement loop，D-Loop）占全部mtDNA的6%左右，位置在np16028-577bp，富含A-T碱基，遗传上是高突变区，mtDNA的重链和轻链复制起始点均位于此区内，主要是调控mtDNA的转录和复制。从理论而言：突变发生在D-Loop区，情况将比发生在编码区的情况严重的多，它将引起整个线粒体功能的紊乱，直接影响线粒体的功能，引起mtDNA复制速率的变化，这与线粒体功能的异常也是紧密相关的。 目前对T2DM在基因水平研究中主要集中在编码区，而对非编码区研究的较少；同时非编码区为一高变异区，对浙江汉族人群在该区域的变异情况报道较少。 　　2、技术原理及性能指标 　 ①随机收集浙江地区汉族人群中无血缘关系的199例被确诊为T2DM患者，详细记录每例患者的临床资料及主要生化指标，同时随机选取102例健康体检者（排除糖尿病、糖耐量异常、高血压等相关疾病）作为正常对照，两者其年龄、性别等指标无统计学差异（P＞0.05）； ②提取全血基因组DNA，用特定的针对整个mtDNA D-Loop基因区域的两对引物扩增出PCR产物并纯化； ③对PCR纯化产物直接测序分析； ④使用生物信息学软件（Gentle、Chromas等）进行与标准剑桥序列的比对分析，查找变异位点并进行相关分析。 　　3、技术的创造性与先进性 　　该课题设计合理，具有较强的创新性。虽先前已明确某些线粒体基因缺陷可导致T2DM的发生，但之前的研究大多集中在线粒体基因编码区，而线粒体基因非编码区尤其是基因复制的控制区（D-Loop区）的变异与糖尿病的关系研究较少。本课题通过研究线粒体基因在T2DM及其在家系遗传中的发生情况，掌握了浙江汉族人群T2DM患者mtDNA D-Loop区基因和剑桥标准序列之间的差异， 及其与各临床主要指标的相关性，为进一步研究T2DM的发病机理，及对其进行早期针对性治疗、预测和评估提供可能。 　　4、技术的成熟程度，适用范围和安全性 　　①分析浙江汉族人群2型糖尿病（T2DM）mtDNA D-Loop区基因和剑桥标准序列之间的差异，并筛查了与T2DM相关的突变位点； 　　②探讨mtDNA D-Loop区基因变异与T2DM主要临床指标及并发症的相关性，为T2DM的发生发展提供风险预报。 　　5、应用情况及存在的问题 　　通过本课题的研究，与临床相关的np73A-G、np263A-G位点的发现对以后研究中国浙江汉族人群的研究提供了可靠的参考依据，并全面地掌握了D-Loop基因区与2型糖尿病的发病及相关并发症之间的相关性，为以后糖尿病的基因诊断及治疗提供了很好的理论依据。