一、简要技术说明及主要技术性能指标： 　　1、简要技术说明： 　　本研究制备小鼠肝损伤模型，获得肝脏损伤条件培养液，诱导mBM-MSCs向肝细胞分化。检测AFP、CK19、CK18、ALB和TAT等基因的表达，验证已分化为肝细胞。应用小鼠全基因组芯片分析肝脏损伤前后基因表达差异，筛选肝细胞分化中的关键细胞因子，利用抗体免疫沉淀法评价细胞因子在mBM-MSCs分化中的作用，发现FGF-4、HGF和OSM可能是诱导mBM-MSCs分化肝细胞的关键因子。用Real-time PCR和ELISA分析小鼠肝脏损伤前后FGF-4、HGF和OSM的动态变化；观察从条件培养液移去HGF、FGF-4、OSM及向条件培养液中添加FGF-4、HGF、OSM后，诱导干细胞定向分化肝细胞的变化，以验证三种因子的功能。用去乙酰化酶抑制剂VPA预处理mBM-MSCs，探索其对提高了干细胞向肝细胞分化效率的作用。 　　设计了细胞因子组合、损伤肝脏条件培养液和肝脏损伤小鼠血清协同细胞因子三种肝细胞体外跨越分化诱导体系，分别对人脐血和骨髓来源的单个核细胞及造血和间充质干细胞进行了诱导分化；最终建立FGF-4、HGF和OSM三因子组合诱导单个核细胞、造血和间充质干细胞跨越分化肝细胞方法，并为目前最简化和有效诱导体系。 　　2、主要技术性能指标： 　　（1）建立了小鼠损伤肝组织条件培养液诱导骨髓间充质干细胞（mBM-MSCs）体外分化肝细胞的技术体系。 　　（2）利用小鼠全基因组表达芯片、Real-time PCR、免疫共沉淀和细胞因子组合诱导等技术，筛选和鉴定了小鼠损伤肝组织条件培养液中诱导mBM-MSCs体外分化肝细胞的关键因子（HGF、FGF-4和OSM），并揭示其作用。 　　（3）建立VPA提高细胞因子诱导mBM-MSCs分化肝细胞效率的新技术，并了解其调控肝细胞分化的初步机制。 　　（4）构建造血干细胞体外定向分化为肝细胞的诱导体系，包括： 　　①构建FGF-4、HGF和OSM细胞因子组合诱导体系； 　　②胎肝条件培养液诱导体系； 　　③损伤肝脏条件培养诱导体系。达到简单、高效。 　　二、推广应用前景与措施： 　　本研究筛选和鉴定了FGF-4、HGF和OSM是间充质干细胞跨越分化肝细胞的重要因子。建立了三套肝细胞分化的诱导体系，有： 　　①构建FGF-4、HGF和OSM细胞因子组合诱导体系； 　　②胎肝条件培养液诱导体系； 　　③损伤肝脏条件培养诱导体系。尤其FGF-4、HGF和OSM三因子组合诱导单个核细胞、造血和间充质干细胞跨越分化肝细胞方法，是首次建立并为目前最简化的有效组合。 　　比较脐血干细胞和骨髓干细胞向肝细胞分化效果，提出骨髓是干细胞定向分化肝细胞更理想的源细胞。 　　本研究为干细胞治疗严重肝脏疾病的临床应用提供了理论和技术基础，具有重要的学术意义和使用价值。 　　研究发表了相关学术论文18篇（其中SCI刊物9篇），申报国家发明专利2项，通过项目的实施，培养了博士研究生2名，硕士研究生2名，并初步建立起一支能在干细胞前沿领域从事创新性研究的人才队伍，构建了相关的技术体系和实验平台。 　　进一步的推广应用措施有： 　　1、申报科研成果奖。 　　2、申报省医药成果重点推广项目，并作推广。 　　3、申报以该内容为主的省级或市级继续教育项目。 　　4、参加学术交流会3次以上。

　　一、简要技术说明及主要技术性能指标： 　　1、简要技术说明： 　　本研究制备小鼠肝损伤模型，获得肝脏损伤条件培养液，诱导mBM-MSCs向肝细胞分化。检测AFP、CK19、CK18、ALB和TAT等基因的表达，验证已分化为肝细胞。应用小鼠全基因组芯片分析肝脏损伤前后基因表达差异，筛选肝细胞分化中的关键细胞因子，利用抗体免疫沉淀法评价细胞因子在mBM-MSCs分化中的作用，发现FGF-4、HGF和OSM可能是诱导mBM-MSCs分化肝细胞的关键因子。用Real-time PCR和ELISA分析小鼠肝脏损伤前后FGF-4、HGF和OSM的动态变化；观察从条件培养液移去HGF、FGF-4、OSM及向条件培养液中添加FGF-4、HGF、OSM后，诱导干细胞定向分化肝细胞的变化，以验证三种因子的功能。用去乙酰化酶抑制剂VPA预处理mBM-MSCs，探索其对提高了干细胞向肝细胞分化效率的作用。 　　设计了细胞因子组合、损伤肝脏条件培养液和肝脏损伤小鼠血清协同细胞因子三种肝细胞体外跨越分化诱导体系，分别对人脐血和骨髓来源的单个核细胞及造血和间充质干细胞进行了诱导分化；最终建立FGF-4、HGF和OSM三因子组合诱导单个核细胞、造血和间充质干细胞跨越分化肝细胞方法，并为目前最简化和有效诱导体系。 　　2、主要技术性能指标： 　　（1）建立了小鼠损伤肝组织条件培养液诱导骨髓间充质干细胞（mBM-MSCs）体外分化肝细胞的技术体系。 　　（2）利用小鼠全基因组表达芯片、Real-time PCR、免疫共沉淀和细胞因子组合诱导等技术，筛选和鉴定了小鼠损伤肝组织条件培养液中诱导mBM-MSCs体外分化肝细胞的关键因子（HGF、FGF-4和OSM），并揭示其作用。 　　（3）建立VPA提高细胞因子诱导mBM-MSCs分化肝细胞效率的新技术，并了解其调控肝细胞分化的初步机制。 　　（4）构建造血干细胞体外定向分化为肝细胞的诱导体系，包括： 　　①构建FGF-4、HGF和OSM细胞因子组合诱导体系； 　　②胎肝条件培养液诱导体系； 　　③损伤肝脏条件培养诱导体系。达到简单、高效。 　　二、推广应用前景与措施： 　　本研究筛选和鉴定了FGF-4、HGF和OSM是间充质干细胞跨越分化肝细胞的重要因子。建立了三套肝细胞分化的诱导体系，有： 　　①构建FGF-4、HGF和OSM细胞因子组合诱导体系； 　　②胎肝条件培养液诱导体系； 　　③损伤肝脏条件培养诱导体系。尤其FGF-4、HGF和OSM三因子组合诱导单个核细胞、造血和间充质干细胞跨越分化肝细胞方法，是首次建立并为目前最简化的有效组合。 　　比较脐血干细胞和骨髓干细胞向肝细胞分化效果，提出骨髓是干细胞定向分化肝细胞更理想的源细胞。 　　本研究为干细胞治疗严重肝脏疾病的临床应用提供了理论和技术基础，具有重要的学术意义和使用价值。 　　研究发表了相关学术论文18篇（其中SCI刊物9篇），申报国家发明专利2项，通过项目的实施，培养了博士研究生2名，硕士研究生2名，并初步建立起一支能在干细胞前沿领域从事创新性研究的人才队伍，构建了相关的技术体系和实验平台。 　　进一步的推广应用措施有： 　　1、申报科研成果奖。 　　2、申报省医药成果重点推广项目，并作推广。 　　3、申报以该内容为主的省级或市级继续教育项目。 　　4、参加学术交流会3次以上。