一、简要技术说明及主要技术性能指标： 　　1、简要技术说明： 　　本研究采用全骨髓贴壁培养法分离到小鼠mBM-MSCs，并通过流式细胞术鉴定这些细胞表面分子标记加以确证。制备小鼠肝损伤模型，获得肝脏损伤条件培养液，用以诱导mBM-MSCs向肝细胞分化。检测AFP、CK19、CK18、ALB和TAT的等基因的表达，证明其为具有肝细胞功能的肝细胞。 　　应用小鼠全基因组芯片分析肝脏损伤前后基因表达差异，筛查肝细胞分化发育相关的细胞因子，利用抗体免疫沉淀实验评价细胞因子在mBM-MSCs分化中的作用，发现FGF-4、HGF和OSM可能是诱导mBM-MSCs分化肝细胞的关键因子。再用Real-time PCR和ELISA分析小鼠肝脏损伤前后FGF-4、HGF和OSM的动态变化；免疫沉淀技术将HGF、FGF-4和OSM从条件培养液中移去对mBM-MSCs定向分化的影响，及向移除FGF-4、HGF和OSM的条件培养液中添加不同浓度的三种因子后诱导干细胞定向分化肝细胞的变化，验证三种因子的功能。确定HGF、FGF-4和OSM是定向分化的关键因子，并发现HGF和FGF-4可能在肝细胞早期分化中发挥作用，OSM可能在后期肝细胞成熟方面发挥作用。 　　进一步用去乙酰化酶抑制剂VPA预处理mBM-MSCs，采用分步法依次添加FGF-4、HGF和OSM的优化诱导体系，显著提高了干细胞向肝细胞的分化效率。 　　2、主要技术性能指标： 　　（1）建立了小鼠损伤肝组织条件培养液诱导骨髓间充质干细胞（mBM-MSCs）体外分化肝细胞的技术体系。 　　（2）利用小鼠全基因组表达芯片、Real-time PCR、免疫共沉淀和细胞因子组合诱导等技术，筛选和鉴定了小鼠损伤肝组织条件培养液中诱导mBM-MSCs体外分化肝细胞的关键因子（HGF、FGF-4和OSM），并揭示了HGF和FGF-4是早期参与启动mBM-MSCs分化肝细胞，OSM是促进肝细胞后期分化成熟所必需。 　　（3）建立了VPA提高细胞因子诱导mBM-MSCs分化肝细胞效率的新技术，发现了VPA参与调控肝细胞分化的初步机制。 　　二、推广应用前景与措施： 　　本研究筛选和鉴定了FGF-4、HGF和OSM是诱导间充质干细胞跨越分化肝细胞的重要因子，改进与优化诱导间充质干细胞跨越分化肝细胞的诱导体系，大大提高了肝细胞定向分化效率，为以后干细胞治疗严重肝脏疾病的临床应用提供了理想的模型和技术基础，具有重要的学术意义和临床应用价值。 　　研究共发表了相关学术论文13篇（其中SCI刊物9篇），申报国家发明专利一项。 　　进一步的推广应用措施有： 　　1、申报科研成果奖。 　　2、申报省医药成果重点推广项目，并作推广。 　　3、申报以该内容为主的省级或市级继续教育项目。 　　4、参加国内外学术交流会2次以上。 　　5、为临床应用作准备。

　　一、简要技术说明及主要技术性能指标： 　　1、简要技术说明： 　　本研究采用全骨髓贴壁培养法分离到小鼠mBM-MSCs，并通过流式细胞术鉴定这些细胞表面分子标记加以确证。制备小鼠肝损伤模型，获得肝脏损伤条件培养液，用以诱导mBM-MSCs向肝细胞分化。检测AFP、CK19、CK18、ALB和TAT的等基因的表达，证明其为具有肝细胞功能的肝细胞。 　　应用小鼠全基因组芯片分析肝脏损伤前后基因表达差异，筛查肝细胞分化发育相关的细胞因子，利用抗体免疫沉淀实验评价细胞因子在mBM-MSCs分化中的作用，发现FGF-4、HGF和OSM可能是诱导mBM-MSCs分化肝细胞的关键因子。再用Real-time PCR和ELISA分析小鼠肝脏损伤前后FGF-4、HGF和OSM的动态变化；免疫沉淀技术将HGF、FGF-4和OSM从条件培养液中移去对mBM-MSCs定向分化的影响，及向移除FGF-4、HGF和OSM的条件培养液中添加不同浓度的三种因子后诱导干细胞定向分化肝细胞的变化，验证三种因子的功能。确定HGF、FGF-4和OSM是定向分化的关键因子，并发现HGF和FGF-4可能在肝细胞早期分化中发挥作用，OSM可能在后期肝细胞成熟方面发挥作用。 　　进一步用去乙酰化酶抑制剂VPA预处理mBM-MSCs，采用分步法依次添加FGF-4、HGF和OSM的优化诱导体系，显著提高了干细胞向肝细胞的分化效率。 　　2、主要技术性能指标： 　　（1）建立了小鼠损伤肝组织条件培养液诱导骨髓间充质干细胞（mBM-MSCs）体外分化肝细胞的技术体系。 　　（2）利用小鼠全基因组表达芯片、Real-time PCR、免疫共沉淀和细胞因子组合诱导等技术，筛选和鉴定了小鼠损伤肝组织条件培养液中诱导mBM-MSCs体外分化肝细胞的关键因子（HGF、FGF-4和OSM），并揭示了HGF和FGF-4是早期参与启动mBM-MSCs分化肝细胞，OSM是促进肝细胞后期分化成熟所必需。 　　（3）建立了VPA提高细胞因子诱导mBM-MSCs分化肝细胞效率的新技术，发现了VPA参与调控肝细胞分化的初步机制。 　　二、推广应用前景与措施： 　　本研究筛选和鉴定了FGF-4、HGF和OSM是诱导间充质干细胞跨越分化肝细胞的重要因子，改进与优化诱导间充质干细胞跨越分化肝细胞的诱导体系，大大提高了肝细胞定向分化效率，为以后干细胞治疗严重肝脏疾病的临床应用提供了理想的模型和技术基础，具有重要的学术意义和临床应用价值。 　　研究共发表了相关学术论文13篇（其中SCI刊物9篇），申报国家发明专利一项。 　　进一步的推广应用措施有： 　　1、申报科研成果奖。 　　2、申报省医药成果重点推广项目，并作推广。 　　3、申报以该内容为主的省级或市级继续教育项目。 　　4、参加国内外学术交流会2次以上。 　　5、为临床应用作准备。