1.课题来源与背景 脐血是一种非常有潜力的造血干细胞资源，脐血中含有丰富的造血干/祖细胞（HSCs/HPCs），具有高度的自我更新能力和分化能力。脐血造血干细胞比骨髓和动员的外周血来源的造血干细胞更原始、更具有自我更新、增殖分化和体外扩增潜能；而且脐带血中的淋巴细胞未接受外界抗原刺激，其免疫原性较弱。因此，与骨髓和外周血干细胞移植相比，脐带血干细胞移植具有来源丰富、再生能力强、即时性、HLA相容性要求低、成本低廉等优点。近年来，脐血造血干细胞移植飞速发展为一种高科技生物治疗手段，现已广泛应用于许多疾病的治疗，包括恶性血液疾病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、自身免疫性疾病、严重免疫缺陷症等，临床证明具有一定的疗效。目前脐血移植的供者已经从HLA相合的同胞过渡到HLA不相合的无关供者，移植对象从儿童过渡到成人。针对在移植过程中脐血干细胞采集量有限，所含的核细胞数量较少的问题，近来的研究主要关注在脐血干细胞的体外扩增、混合脐血移植、提高HSCs/HPCs的归巢能力等方面。 目前，脐血的主要临床应用是脐血造血干细胞移植治疗各种疾病，并针对脐血干细胞的利用率进行了大量研究和临床试验。此外，脐血中的非造血干细胞在未来细胞治疗和再生医学中也具有广阔的应用前景。随着对脐血干细胞生物学特性研究的深入及干细胞组织工程技术的发展，将可能为脐血干细胞移植和分化提供新的策略和方案，以利于更充分地开发和应用丰富的脐血干细胞资源。 2.技术原理与性能指标 该项目的主要目的是得到具有髓、淋两系分化潜能、具有高活性的脐带血造血干细胞。本方法系直接从脐带血中分离间充质干细胞，不经过培养，保持其原始的特性，能更好地适应临床应用。并经适当的体外诱导实验，以验证其分化性能。主要研究在产房中无菌获取脐血，在24小时内封闭式密度梯度离心原理分离脐血造血干细胞，并通过特地的程控降温程序和冻存保护液的配置，将产品包装质量检测后，进行长期保存和运输。 1）脐带血采集和运输过程的无菌化率95﹪以上。 2）脐带血造血干细胞分离效率90﹪以上。 3）脐带血造血干细胞冻存复苏效率高于95﹪。 4）无支原体、细菌、病毒等污染。 3.技术的创造性与先进性 传统的造血干细胞主要通过从健康人髂骨中提取骨髓后，分离得到，这种方法操作复杂，且给供者带来极大的痛苦。临床应用上也存在着骨髓采集位点的潜在感染、采集过程对供者造成伤害、移植细胞有限等问题。而脐带血来源广泛，且原属于医疗废弃物，能大量广泛的获得。 本项目则采用医疗废弃物脐带血直接分离获得造血干细胞。并开发了以下几个技术创新点： 1）自主创新脐带血的采集和运输方法：通过采集、运输标准程序的设计，以及运输装置的调整，减少了运输污染率，提高了长距离运输能力，确保24小时运输后细胞仍有较高活率。 2）自主设计了造血干细胞分离方法，以密度梯度离心原理为基础，设计了新型分离液和分离技术，与Ficoll溶液分离细胞的程序相比程序简化，同时也克服光敏性所带来的操作问题。与经典方法相比，由于新工艺采用内封闭设计，也极大的降低了污染。 3）设计了新颖的程控降温程序，解决了传统-10℃～20℃冻存区域冰晶易形成问题，提高了细胞活率，设计了阶段降温所无法实施的过程温度精确控制，提高复苏活率和稳定性。 4、技术的成熟度与应用情况 本公司对该项目前期投入大量资金进行技术研究开发、市场调查等准备工作。经专业技术人员研究讨论后，进行新产品的试生产，取得成效。该新技术水平先进，已基本确立一套脐带血造血干细胞高效分离、纯化以及超低温保存方法，并能保证造血干细胞在长时间运输，储存后的细胞活性，使脐血造血干细胞临床应用能力进一步提高。 5、应用情况 本成果产品经中国人民解放军九八医院、湖州师范学院细胞工程研究所、江西医学院分子医学中心研究所的使用，达到了理想的效果。能产生较好的经济和社会效益。

1.课题来源与背景 脐血是一种非常有潜力的造血干细胞资源，脐血中含有丰富的造血干/祖细胞（HSCs/HPCs），具有高度的自我更新能力和分化能力。脐血造血干细胞比骨髓和动员的外周血来源的造血干细胞更原始、更具有自我更新、增殖分化和体外扩增潜能；而且脐带血中的淋巴细胞未接受外界抗原刺激，其免疫原性较弱。因此，与骨髓和外周血干细胞移植相比，脐带血干细胞移植具有来源丰富、再生能力强、即时性、HLA相容性要求低、成本低廉等优点。近年来，脐血造血干细胞移植飞速发展为一种高科技生物治疗手段，现已广泛应用于许多疾病的治疗，包括恶性血液疾病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、自身免疫性疾病、严重免疫缺陷症等，临床证明具有一定的疗效。目前脐血移植的供者已经从HLA相合的同胞过渡到HLA不相合的无关供者，移植对象从儿童过渡到成人。针对在移植过程中脐血干细胞采集量有限，所含的核细胞数量较少的问题，近来的研究主要关注在脐血干细胞的体外扩增、混合脐血移植、提高HSCs/HPCs的归巢能力等方面。 目前，脐血的主要临床应用是脐血造血干细胞移植治疗各种疾病，并针对脐血干细胞的利用率进行了大量研究和临床试验。此外，脐血中的非造血干细胞在未来细胞治疗和再生医学中也具有广阔的应用前景。随着对脐血干细胞生物学特性研究的深入及干细胞组织工程技术的发展，将可能为脐血干细胞移植和分化提供新的策略和方案，以利于更充分地开发和应用丰富的脐血干细胞资源。 2.技术原理与性能指标 该项目的主要目的是得到具有髓、淋两系分化潜能、具有高活性的脐带血造血干细胞。本方法系直接从脐带血中分离间充质干细胞，不经过培养，保持其原始的特性，能更好地适应临床应用。并经适当的体外诱导实验，以验证其分化性能。主要研究在产房中无菌获取脐血，在24小时内封闭式密度梯度离心原理分离脐血造血干细胞，并通过特地的程控降温程序和冻存保护液的配置，将产品包装质量检测后，进行长期保存和运输。 1）脐带血采集和运输过程的无菌化率95﹪以上。 2）脐带血造血干细胞分离效率90﹪以上。 3）脐带血造血干细胞冻存复苏效率高于95﹪。 4）无支原体、细菌、病毒等污染。 3.技术的创造性与先进性 传统的造血干细胞主要通过从健康人髂骨中提取骨髓后，分离得到，这种方法操作复杂，且给供者带来极大的痛苦。临床应用上也存在着骨髓采集位点的潜在感染、采集过程对供者造成伤害、移植细胞有限等问题。而脐带血来源广泛，且原属于医疗废弃物，能大量广泛的获得。 本项目则采用医疗废弃物脐带血直接分离获得造血干细胞。并开发了以下几个技术创新点： 1）自主创新脐带血的采集和运输方法：通过采集、运输标准程序的设计，以及运输装置的调整，减少了运输污染率，提高了长距离运输能力，确保24小时运输后细胞仍有较高活率。 2）自主设计了造血干细胞分离方法，以密度梯度离心原理为基础，设计了新型分离液和分离技术，与Ficoll溶液分离细胞的程序相比程序简化，同时也克服光敏性所带来的操作问题。与经典方法相比，由于新工艺采用内封闭设计，也极大的降低了污染。 3）设计了新颖的程控降温程序，解决了传统-10℃～20℃冻存区域冰晶易形成问题，提高了细胞活率，设计了阶段降温所无法实施的过程温度精确控制，提高复苏活率和稳定性。 4、技术的成熟度与应用情况 本公司对该项目前期投入大量资金进行技术研究开发、市场调查等准备工作。经专业技术人员研究讨论后，进行新产品的试生产，取得成效。该新技术水平先进，已基本确立一套脐带血造血干细胞高效分离、纯化以及超低温保存方法，并能保证造血干细胞在长时间运输，储存后的细胞活性，使脐血造血干细胞临床应用能力进一步提高。 5、应用情况 本成果产品经中国人民解放军九八医院、湖州师范学院细胞工程研究所、江西医学院分子医学中心研究所的使用，达到了理想的效果。能产生较好的经济和社会效益。