1.标本的收集和HPV感染患者ACCESS数据库的建立。 　　2.宫颈癌细胞基因组的提取。 　　3.卡介苗穿梭表达载体的构建及鉴定：分别以卡介苗(BCG)基因组DNA及宫颈癌组织提取DNA为模板，通过PCR扩增得到19kD抗原的胞壁区及其上游调控元件(19ss)基因序列和HPV16型E7基因序列。先将19ss基因与大肠杆菌－分枝杆菌穿梭质粒pMV261重组，得到重组质粒pMCW。再将E7基因克隆至pMCW，得到重组质粒pMCW-E7。最后用PCR引物定点诱变法突变E7基因与转化有关的位点，得到重组质粒pMCW-mE7。对重组质粒pMCW-mE7用PCR扩增、双酶切及测序鉴定证实，19ss基因及突变的E7基因正确插入穿梭质粒pMV261。成功构建了重组穿梭质粒pMCW-mE7。 　　4.卡介苗的培养。 　　5.电转化技术构建重组BCG-HPV疫苗。 　　6.进一步进行临床前的各项研究后，BCG-HPV疫苗将具有预防HPV感染患者发展为宫颈癌作用。

　　1.标本的收集和HPV感染患者ACCESS数据库的建立。 　　2.宫颈癌细胞基因组的提取。 　　3.卡介苗穿梭表达载体的构建及鉴定：分别以卡介苗(BCG)基因组DNA及宫颈癌组织提取DNA为模板，通过PCR扩增得到19kD抗原的胞壁区及其上游调控元件(19ss)基因序列和HPV16型E7基因序列。先将19ss基因与大肠杆菌－分枝杆菌穿梭质粒pMV261重组，得到重组质粒pMCW。再将E7基因克隆至pMCW，得到重组质粒pMCW-E7。最后用PCR引物定点诱变法突变E7基因与转化有关的位点，得到重组质粒pMCW-mE7。对重组质粒pMCW-mE7用PCR扩增、双酶切及测序鉴定证实，19ss基因及突变的E7基因正确插入穿梭质粒pMV261。成功构建了重组穿梭质粒pMCW-mE7。 　　4.卡介苗的培养。 　　5.电转化技术构建重组BCG-HPV疫苗。 　　6.进一步进行临床前的各项研究后，BCG-HPV疫苗将具有预防HPV感染患者发展为宫颈癌作用。