一、课题来源与背景
本课题为广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研项目(合同号Z2007007)。
二、技术原理及性能指标
1.GK-PROD酶偶联两点法测定1,5-AG原理：通过CK将样品中的葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖(G6P)，并通过系统中的丙酮酸激酶(PK)和磷酸烯醇式丙酮酸盐(PEP)建立ATP再生系统，确保葡萄糖向G6P转化，以消除葡萄糖对测定的干扰。样品中1,5-AG随即进人主反应系统，经毗喃糖氧化酶(PROD)作用，被氧化生成1,5-脱水果糖和H2O2，后者在辣根过氧化物酶催化下，借4-氨基安替毗咐和3-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸显色系统显色定量。
2.性能指标
①GK-PROD酶偶联两点法测定1,5-AG的方法学评价。
②正常对照组、糖耐量减低组及糖尿病组血清1,5-AG水平的比较。
③1,5-AG水平与其他糖代谢指标的相关分析。
④FPG、HbA1c、1,5-AG与诊断为DM相关的临界点。
三、技术的创造性与先进性
本研究创新之处在于通过重复试验、干扰试验、回收试验、线性与最低检测限测定等对GK-PROD酶偶联两点法测定1,5-AG进行了方法学评价。通过采用两样本均数配对t检验，比较正常对照组、糖耐量减低组及糖尿病组血清1,5-AG水平。通过采用Pearson简单相关分析，分析了1,5-AG水平与其他糖代谢指标的关系。通过绘制ROC曲线，确定了FPG、HbA1c、1,5-AG与诊断为DM相关的临界点、灵敏度和特异度。
四、技术的成熟程度，适用范围和安全性
本研究项目的检测技术已成熟，操作简单，方法灵敏、准确、稳定、特异，线性范围符合临床要求，可为糖尿病的早期预测提供可靠的依据。整个技术对人体无任何危害性。
五、应用情况及存在的问题
随着1,5-AG测定方法的不断改正和研发，特别是本酶法的建立和不断改正，血清1,5-AG测定在国内临床实验室得以实现，为1,5-AG指标在临床推广应用提供了良好的前景。但建立中国人健康对照、糖耐量减低患者和糖尿病患者的1,5-AG参考范围，还有待于大规模的普查，这也是今后努力研究的方向。 |
