课题来源： 　　山西省农业和社会发展科技攻关项目（2006031089-04）。 　　背景： 　　人脐血中的造血干细胞较外周血和骨髓更为原始，有望成为骨髓造血干细胞的良好替代品 。但脐血中造血干细胞数量较少成为限制脐血移植广泛开展的难题。如何有效扩增脐血干细胞并保持其造血干/祖细胞特性，达到造血重建是亟待解决的关键问题。 　　技术原理及性能指标： 　　本研究采用免疫磁珠分离系统分选脐血中AC133+细胞，并对AC133+、AC133-CD34+和CD34+细胞造血活性进行研究。采用直接免疫荧光双色标记法、流式细胞仪技术、RT-PCR等技术研究了早期效应细胞因子受体/配体（Flt3/FL和c-kit/SCF）系统在正常造血调控中的作用和意义。采用Transwell小室和CXCR4阻断剂等方法探讨趋化因子SDF-1以及其受体CXCR4在脐血AC133+细胞迁移中的作用。采用纤连蛋白(fibronectin,FN)的PBS包被等方法探讨了SDF-1对脐血AC133+细胞黏附作用的影响、SDF-1和干细胞归巢的相关性。采用贴壁细胞培养法建立了以hUCBSCs为滋养层的脐血AC133+细胞培养体系。克隆VCAM-1基因，构建VCAM-1-pcDNA3.1(+)真核表达载体并转染人脐血基质细胞，观察其对AC133+细胞造血调节作用。 　　技术的成熟度、适用范围和安全性： 　　研究的指标有很好的临床应用指导意义，为造血干细胞移植和基因治疗的基础和临床研究提供新的思路和方法。 　　技术的创造性与先进性： 　　（1）用PHK26染色方法结合SDF-1及C3a观察AC133+细胞分化、迁移、归巢趋化及粘附功能。从基因转录水平、蛋白表达水平及功能分析三个层次了解作用于早期阶段造血的细胞因子Flt3和c-kit及其配体FL和SCF在AC133+细胞中的表达及意义。 　（2）建立以hUCBSCs为滋养层的脐血AC133+细胞培养体系，并对短期扩增后的造血干/祖细胞进行CFU-GMCFU-ECFU-Mg半固体培养。从IL-1刺激的人脐静脉内皮细胞中克隆VCAM-1cDNA。 　　应用情况及存在的问题： 　　结合早期效应因子Flt3、c-kit等对临床移植后病人进行造血重建，提高造血干细胞移植的成功率。但临床中移植病人较少，移植后病人的复诊及随访工作还未完善是应用中存在的问题。

　　课题来源： 　　山西省农业和社会发展科技攻关项目（2006031089-04）。 　　背景： 　　人脐血中的造血干细胞较外周血和骨髓更为原始，有望成为骨髓造血干细胞的良好替代品 。但脐血中造血干细胞数量较少成为限制脐血移植广泛开展的难题。如何有效扩增脐血干细胞并保持其造血干/祖细胞特性，达到造血重建是亟待解决的关键问题。 　　技术原理及性能指标： 　　本研究采用免疫磁珠分离系统分选脐血中AC133+细胞，并对AC133+、AC133-CD34+和CD34+细胞造血活性进行研究。采用直接免疫荧光双色标记法、流式细胞仪技术、RT-PCR等技术研究了早期效应细胞因子受体/配体（Flt3/FL和c-kit/SCF）系统在正常造血调控中的作用和意义。采用Transwell小室和CXCR4阻断剂等方法探讨趋化因子SDF-1以及其受体CXCR4在脐血AC133+细胞迁移中的作用。采用纤连蛋白(fibronectin,FN)的PBS包被等方法探讨了SDF-1对脐血AC133+细胞黏附作用的影响、SDF-1和干细胞归巢的相关性。采用贴壁细胞培养法建立了以hUCBSCs为滋养层的脐血AC133+细胞培养体系。克隆VCAM-1基因，构建VCAM-1-pcDNA3.1(+)真核表达载体并转染人脐血基质细胞，观察其对AC133+细胞造血调节作用。 　　技术的成熟度、适用范围和安全性： 　　研究的指标有很好的临床应用指导意义，为造血干细胞移植和基因治疗的基础和临床研究提供新的思路和方法。 　　技术的创造性与先进性： 　　（1）用PHK26染色方法结合SDF-1及C3a观察AC133+细胞分化、迁移、归巢趋化及粘附功能。从基因转录水平、蛋白表达水平及功能分析三个层次了解作用于早期阶段造血的细胞因子Flt3和c-kit及其配体FL和SCF在AC133+细胞中的表达及意义。 　（2）建立以hUCBSCs为滋养层的脐血AC133+细胞培养体系，并对短期扩增后的造血干/祖细胞进行CFU-GMCFU-ECFU-Mg半固体培养。从IL-1刺激的人脐静脉内皮细胞中克隆VCAM-1cDNA。 　　应用情况及存在的问题： 　　结合早期效应因子Flt3、c-kit等对临床移植后病人进行造血重建，提高造血干细胞移植的成功率。但临床中移植病人较少，移植后病人的复诊及随访工作还未完善是应用中存在的问题。