一、课题来源与背景 项目来源：山西省卫生厅科技项目 项目编号：200428 二、技术性能与指标 本研究采用聚合酶链反应、脉冲场凝胶电泳和序列测定分子生物学方法，对山西地区178例肺炎克雷伯菌株耐药特征、耐药基因及其分子流行趋势进行了研究。 1、菌株来源：2004～2005年 山西医科大学第一医院、山西省人民医院收集的临床178株肺炎克雷伯菌株，均为非重复鉴定菌株。所有菌株用API20E重新进行生化反应，全部鉴定为肺炎克雷伯菌。大肠埃希菌标准菌株ATCC25922，ESBLs检测质控菌株肺炎克雷伯菌(ATCC700603)，AmpC酶检测质控菌株阴沟肠杆菌029M，由中国疾病预防控制中心提供。 2、超广谱β-内酰胺酶（Extended spectrum β-lactamases，ESBLs）的检测：按CLSI2006年版推荐的确证试验进行。若酶抑制剂复方制剂与单药的抑菌圈直径之差≥5mm则可判断为产ESBLs株，若2者之差＜5mm则为ESBLs阴性株。 3、酶粗提液的制备及改良三维试验：超声破碎法提取β-内酰胺酶，三维试验根据coudron等[1]报道的方法进行。 4、PCR检测耐药基因（ESBLs和AmpC酶）。 5、序列测定及分析：PCR扩增产物送上海生工生物技术公司进行纯化和测序。 6、脉冲场凝胶电泳分析：对耐药菌株进行同源性分析。 三、技术的创造性与先进性 1、在基因水平上揭示了山西地区肺炎克雷伯菌耐药的分子流行趋势； 2、阐述了山西地区肺炎克雷伯的耐药特征； 3、确定了山西地区肺炎克雷伯菌的耐药基因型。 四、技术的成熟程度，实用范围和安全性 研究中涉及到了PCR、DNA序列分析，脉冲场凝胶电泳技术。与当前国内外同类研究、同类技术综合比较技术成熟、像PCR扩增技术在二级以上医疗机构通过技术验收的临床基因扩增实验室都能进行，实用范围广，安全性高。 五、应用情况及存在的问题 本研究对指导临床合理使用抗生素，降低治疗成本，缩短病程，提高治愈率，减少耐药菌株在本地区蔓延、扩散有重要作用。 创造了良好的社会效益和经济效益，可在全省、全国医疗卫生机构推广应用。

一、课题来源与背景 项目来源：山西省卫生厅科技项目 项目编号：200428 二、技术性能与指标 本研究采用聚合酶链反应、脉冲场凝胶电泳和序列测定分子生物学方法，对山西地区178例肺炎克雷伯菌株耐药特征、耐药基因及其分子流行趋势进行了研究。 1、菌株来源：2004～2005年 山西医科大学第一医院、山西省人民医院收集的临床178株肺炎克雷伯菌株，均为非重复鉴定菌株。所有菌株用API20E重新进行生化反应，全部鉴定为肺炎克雷伯菌。大肠埃希菌标准菌株ATCC25922，ESBLs检测质控菌株肺炎克雷伯菌(ATCC700603)，AmpC酶检测质控菌株阴沟肠杆菌029M，由中国疾病预防控制中心提供。 2、超广谱β-内酰胺酶（Extended spectrum β-lactamases，ESBLs）的检测：按CLSI2006年版推荐的确证试验进行。若酶抑制剂复方制剂与单药的抑菌圈直径之差≥5mm则可判断为产ESBLs株，若2者之差＜5mm则为ESBLs阴性株。 3、酶粗提液的制备及改良三维试验：超声破碎法提取β-内酰胺酶，三维试验根据coudron等[1]报道的方法进行。 4、PCR检测耐药基因（ESBLs和AmpC酶）。 5、序列测定及分析：PCR扩增产物送上海生工生物技术公司进行纯化和测序。 6、脉冲场凝胶电泳分析：对耐药菌株进行同源性分析。 三、技术的创造性与先进性 1、在基因水平上揭示了山西地区肺炎克雷伯菌耐药的分子流行趋势； 2、阐述了山西地区肺炎克雷伯的耐药特征； 3、确定了山西地区肺炎克雷伯菌的耐药基因型。 四、技术的成熟程度，实用范围和安全性 研究中涉及到了PCR、DNA序列分析，脉冲场凝胶电泳技术。与当前国内外同类研究、同类技术综合比较技术成熟、像PCR扩增技术在二级以上医疗机构通过技术验收的临床基因扩增实验室都能进行，实用范围广，安全性高。 五、应用情况及存在的问题 本研究对指导临床合理使用抗生素，降低治疗成本，缩短病程，提高治愈率，减少耐药菌株在本地区蔓延、扩散有重要作用。 创造了良好的社会效益和经济效益，可在全省、全国医疗卫生机构推广应用。