一、主要技术的简要说明： 　　1、表观遗传学技术手段 　　主要包括应用于整体基因组DNA甲基化模式检测的5mC免疫荧光法、高效毛细管电泳法、液闪计数法，应用于特定基因启动子区CpG岛甲基化模式检测的甲基化特异性PCR、甲基化特异性定量PCR、甲基化DNA 免疫沉淀芯片（ methylated DNA mmunoprecipition-chip，MeDIP-chip）等方法，应用于检测DNA甲基化与组蛋白乙酰化相关关系的染色质免疫沉淀结合定量PCR（chromatin immunoprecipitation-Q-PCR，CHIP-QPCR）等技术。 　　2、构建DNA修复基因缺陷细胞株 　　依据Genbank中人DNA修复基因cDNA序列，设计反义RNA或shRNA→通过重组DNA技术将RNA片段克隆到载体上获重组子→进行酶切鉴定和序列分析→将构建好的载体重组子导入靶细胞，同时设对照组→在经G418筛选后，以荧光显微成像技术观察细胞的转染效果→以蛋白印迹法、实时荧光定量PCR从蛋白水平和mRNA水平分析DNA修复基因的抑制效应→以细胞形态学、细胞生长曲线、细胞周期及软琼脂糖恶性程度鉴定实验等考察缺陷细胞株的生物学性状改变。 　　3、外源环境化学污染物对DNA修复基因的影响 　　MTT法测定细胞增殖功能，确定实验分组→流式细胞仪检测细胞周期→单细胞凝胶电泳检测DNA损伤→实时荧光定量PCR检测经染毒细胞DNA修复基因mRNA水平的表达变化→Wester blot检测经染毒细胞DNA修复基因在蛋白质水平的表达改变。 　　4、人群DNA修复基因多态性研究。 　　人群血样采集→经典的酚→氯仿抽提法抽提外周血DNA→聚合酶链反应扩增DNA修复基因目的片段→单链构象多态性（single chain conformationpolymorphism SSCP）分析→变性梯度凝胶电泳（denaturing gradient gelelectrophoresis DGGE）分析→DNA测序验证结果→数据处理及统计学分析。 　　二、应用前景 　　本研究的成果可以通过科研合作、继续教育培训、学术交流、学生培养等多种手段得以推广和应用。本研究系列中涉及到多种分子生物学方法的关键技术，是其在预防医学、毒理学领域中的充分运用，全国已有五家高等院校、科研院所（北京大学公共卫生学院、南方医科大学公共卫生与热带医学学院、深圳大学生命科学院、中南大学公共卫生学院、福建医科大学公共卫生学院）利用研究系列中所构建的缺陷细胞株、适应性反应模型、少数民族人群DNA样本开展了关于人类DNA修复基因功能及多态性研究，为其所承担的国家自然科学基金、广东省自然科学基金等科研项目的顺利开展提供了技术及样本等多方支持。 　　共有10名博士研究生，8名硕士研究生的毕业论文依托该研究系列完成，目前尚有2名博士正借助该系列内容进行毕业论文研究。举办全国性继续教育培训班4次，发表学术论文58篇，其中SCI收录9篇。2001年申请者受邀在中国毒理学会第三届全国学术会议进行特邀报告“我国人类DNA修复系统研究的回顾与展望”。研究团队中先后有12人次受邀，在国际、国内的学术大会上进行了论文交流，获得好评。在预防医学方面，DNA修复基因基因多态性的研究涉及的范围广泛，包括基因多态性与病因未知的疾病关系的研究，也包括对已知特定环境因素致病易感基因的筛选。结合对DNA修复基因功能的研究不仅可以推动遗传易感性标志物的研究，还有助于阐明环境因素的致病机制。

　　一、主要技术的简要说明： 　　1、表观遗传学技术手段 　　主要包括应用于整体基因组DNA甲基化模式检测的5mC免疫荧光法、高效毛细管电泳法、液闪计数法，应用于特定基因启动子区CpG岛甲基化模式检测的甲基化特异性PCR、甲基化特异性定量PCR、甲基化DNA 免疫沉淀芯片（ methylated DNA mmunoprecipition-chip，MeDIP-chip）等方法，应用于检测DNA甲基化与组蛋白乙酰化相关关系的染色质免疫沉淀结合定量PCR（chromatin immunoprecipitation-Q-PCR，CHIP-QPCR）等技术。 　　2、构建DNA修复基因缺陷细胞株 　　依据Genbank中人DNA修复基因cDNA序列，设计反义RNA或shRNA→通过重组DNA技术将RNA片段克隆到载体上获重组子→进行酶切鉴定和序列分析→将构建好的载体重组子导入靶细胞，同时设对照组→在经G418筛选后，以荧光显微成像技术观察细胞的转染效果→以蛋白印迹法、实时荧光定量PCR从蛋白水平和mRNA水平分析DNA修复基因的抑制效应→以细胞形态学、细胞生长曲线、细胞周期及软琼脂糖恶性程度鉴定实验等考察缺陷细胞株的生物学性状改变。 　　3、外源环境化学污染物对DNA修复基因的影响 　　MTT法测定细胞增殖功能，确定实验分组→流式细胞仪检测细胞周期→单细胞凝胶电泳检测DNA损伤→实时荧光定量PCR检测经染毒细胞DNA修复基因mRNA水平的表达变化→Wester blot检测经染毒细胞DNA修复基因在蛋白质水平的表达改变。 　　4、人群DNA修复基因多态性研究。 　　人群血样采集→经典的酚→氯仿抽提法抽提外周血DNA→聚合酶链反应扩增DNA修复基因目的片段→单链构象多态性（single chain conformationpolymorphism SSCP）分析→变性梯度凝胶电泳（denaturing gradient gelelectrophoresis DGGE）分析→DNA测序验证结果→数据处理及统计学分析。 　　二、应用前景 　　本研究的成果可以通过科研合作、继续教育培训、学术交流、学生培养等多种手段得以推广和应用。本研究系列中涉及到多种分子生物学方法的关键技术，是其在预防医学、毒理学领域中的充分运用，全国已有五家高等院校、科研院所（北京大学公共卫生学院、南方医科大学公共卫生与热带医学学院、深圳大学生命科学院、中南大学公共卫生学院、福建医科大学公共卫生学院）利用研究系列中所构建的缺陷细胞株、适应性反应模型、少数民族人群DNA样本开展了关于人类DNA修复基因功能及多态性研究，为其所承担的国家自然科学基金、广东省自然科学基金等科研项目的顺利开展提供了技术及样本等多方支持。 　　共有10名博士研究生，8名硕士研究生的毕业论文依托该研究系列完成，目前尚有2名博士正借助该系列内容进行毕业论文研究。举办全国性继续教育培训班4次，发表学术论文58篇，其中SCI收录9篇。2001年申请者受邀在中国毒理学会第三届全国学术会议进行特邀报告“我国人类DNA修复系统研究的回顾与展望”。研究团队中先后有12人次受邀，在国际、国内的学术大会上进行了论文交流，获得好评。在预防医学方面，DNA修复基因基因多态性的研究涉及的范围广泛，包括基因多态性与病因未知的疾病关系的研究，也包括对已知特定环境因素致病易感基因的筛选。结合对DNA修复基因功能的研究不仅可以推动遗传易感性标志物的研究，还有助于阐明环境因素的致病机制。