简要技术说明： 　　轮状病毒性腹泻在全球已成为一项重要的公共卫生问题，且缺乏特异性治疗措施，因此研制轮状病毒疫苗，是预防病毒性腹泻刻不容缓的任务。基因文库的构建是进行A组轮状病毒vp7基因分子生物学研究的基础，通过构建轮状病毒的基因文库，为促进VP7基因的分子生物学研究和利用vp7衣壳蛋白在病毒感染细胞中的特殊作用来研制基因工程疫苗和基因工程诊断试剂等提供基础材料。 　　本课题主要通过提取的A组轮状病毒总RNA，扩增VP7基因，并连接到pMD18-T载体，转化感受态菌（DH5α），通过蓝白斑筛选实验，筛选DNA阳性重组子（载体+VP7基因片段），并对DNA重组子的质粒进行抽提进行PCR及基因测序鉴定及基因序列分析测得序列与A组轮状病毒标准株VP7蛋白编码的基因序列进行比对其同源性为98.5﹪，结果表明本研究成功构建唐山地区A组轮状病毒VP7基因文库；同时与标准株进行基因差异分析，唐山地方流行株与标准株关键基因没有发生变异。成功构建唐山地区A组轮状病毒VP7基因文库，为轮状病毒基因工程疫苗的研制提供了流行病学依据。 　　应用前景： 　　由于轮状病毒是引起婴幼儿腹泻的常见病原体，卫生措施对轮状病毒传播影响甚小，营养状况对发病危险的重要性也远低于细菌性腹泻，无论是发达国家还是发展中国家，大多数婴幼儿都要受到轮状病毒的感染。A组轮状病毒VP7基因是中和反应的主要抗原之一，对于保护性免疫尤为重要。并且，VP7基因与A组轮状病毒的致病性无关，以此可以作为靶基因研制进行基因工程研究。但轮状病毒为RNA病毒，由于RNA病毒具有特别高的突变率，我国的A组轮状病毒具有多样性，地区检测的结果存在差异，主要流行基因型随着不同地区有所变化。因此，近些年有关轮状病毒的VP7基因片段已有大量研究，但关于比较各地方株与标准株的基因差异，及表达产物的差异还没见报道。 　　本次研究运用尖端的分子生物学技术成功构建唐山地区A组轮状病毒VP基因文库，进一步了解唐山地方株与标准株VP7基因之间的差异，掌握其流行现状，为研制轮状病毒基因工程疫苗打下基础。

　　简要技术说明： 　　轮状病毒性腹泻在全球已成为一项重要的公共卫生问题，且缺乏特异性治疗措施，因此研制轮状病毒疫苗，是预防病毒性腹泻刻不容缓的任务。基因文库的构建是进行A组轮状病毒vp7基因分子生物学研究的基础，通过构建轮状病毒的基因文库，为促进VP7基因的分子生物学研究和利用vp7衣壳蛋白在病毒感染细胞中的特殊作用来研制基因工程疫苗和基因工程诊断试剂等提供基础材料。 　　本课题主要通过提取的A组轮状病毒总RNA，扩增VP7基因，并连接到pMD18-T载体，转化感受态菌（DH5α），通过蓝白斑筛选实验，筛选DNA阳性重组子（载体+VP7基因片段），并对DNA重组子的质粒进行抽提进行PCR及基因测序鉴定及基因序列分析测得序列与A组轮状病毒标准株VP7蛋白编码的基因序列进行比对其同源性为98.5﹪，结果表明本研究成功构建唐山地区A组轮状病毒VP7基因文库；同时与标准株进行基因差异分析，唐山地方流行株与标准株关键基因没有发生变异。成功构建唐山地区A组轮状病毒VP7基因文库，为轮状病毒基因工程疫苗的研制提供了流行病学依据。 　　应用前景： 　　由于轮状病毒是引起婴幼儿腹泻的常见病原体，卫生措施对轮状病毒传播影响甚小，营养状况对发病危险的重要性也远低于细菌性腹泻，无论是发达国家还是发展中国家，大多数婴幼儿都要受到轮状病毒的感染。A组轮状病毒VP7基因是中和反应的主要抗原之一，对于保护性免疫尤为重要。并且，VP7基因与A组轮状病毒的致病性无关，以此可以作为靶基因研制进行基因工程研究。但轮状病毒为RNA病毒，由于RNA病毒具有特别高的突变率，我国的A组轮状病毒具有多样性，地区检测的结果存在差异，主要流行基因型随着不同地区有所变化。因此，近些年有关轮状病毒的VP7基因片段已有大量研究，但关于比较各地方株与标准株的基因差异，及表达产物的差异还没见报道。 　　本次研究运用尖端的分子生物学技术成功构建唐山地区A组轮状病毒VP基因文库，进一步了解唐山地方株与标准株VP7基因之间的差异，掌握其流行现状，为研制轮状病毒基因工程疫苗打下基础。