| 成果名称： |
基于食源性病原菌保守表面蛋白的快速检测的技术平台 |
关键词： |
沙门氏菌;诺如病毒;胶体金免疫横流层析;反转录微滴式数字PCR;光电生物传感器 |
| 成果类别： |
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一级分类名称： |
工业生物技术 |
| 二级分类名称： |
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三级分类名称： |
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| 研究起止时间： |
2015.01 至2017.12 |
成果体现形式（应用技术类）： |
无 |
| 成果属性： |
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成果体现形式（基础理论类）： |
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| 技术成熟度： |
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技术水平： |
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| 研究形式： |
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学科分类1： |
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| 单位名称： |
广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
学科分类2： |
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| 中图分类号1： |
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所属高新技术类别： |
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| 中图分类号2： |
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课题来源： |
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| 应用行业： |
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课题立项名称： |
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| 国家科技计划子类别： |
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课题立项编号： |
2014J4500027 |
| 经费实际投入额
（万元）： |
200.00 |
评价单位： |
广州市科技项目评审中心 |
| 评价形式： |
无 |
应用状态： |
无 |
| 评价日期： |
2018.07.19 |
转让范围： |
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| 评价证书号： |
穗科验字[2018]第0795号 |
推荐单位： |
广州海关（原广东出入境检验检疫局） |
| 推广形式： |
无 |
成果登记号： |
GK180919 |
| 成果简介： |
本课题任务来源于广州市科技创新委员会国际科技合作项目《基于食源性病原菌保守表面蛋白的快速检测的技术平台》。由于我国的食品安全危害问题主要是微生物病原菌和生物毒素造成的食物中毒。食源性致病菌控制方面存在不足的主要原因是缺少行之有效的，既快速又简便，且灵敏与特异的检测方法。有鉴于此，本项目以食源性致病微生物沙门氏菌、诺如病毒作为研究对象，对沙门氏菌表面膜蛋白、诺如病毒核衣壳蛋白VP1分析，研发特异性单抗，制备成金偶联抗体，研究开发快速、简易的横流试纸快速检测方法和光电化学微孔阻抗生物传感器检测方法。本项目获得沙门氏表面膜蛋白、诺如病毒核衣壳蛋白单克隆抗体。建立广谱沙门氏菌胶体金横流免疫层析试纸快速检测方法，开发出相应试纸条，该方法能快速检出多血清群的不同血清型沙门氏菌，并对其它革兰氏阴性菌、阳性菌均无交叉反应，即时检测低限在10^6 cfu/ml，经7h增菌，可检测含有10^2 cfu/g沙门氏菌的食品。建立了一种运用多孔膜和石墨烯量子点搭建的光电生物传感器，实现在30min内对沙门氏菌的超灵敏检测（pM水平）。建立了检测低限为5.4 copies/μL更为敏感的反转录微滴式数字PCR（RT-ddPCR）检测GII型诺如病毒的定量方法，并且优化生食蔬菜中诺如病毒的富集方法，建立了检测低限为7.86×10^2copies/g的生食蔬菜中GII型诺如病毒富集及RT-ddPCR定量检测方法。确定对诺如病毒表面膜重组蛋白有阳性反应的单抗配对，形成胶体金试纸，该试条的检测低限为4.79 x10^2copies/ul。建立了一种快速检测诺如病毒的光电化学免疫生物传感器方法，该传感器方法能够检测到最低浓度为2x10^-10 g/mL（4.9 pM）的重组型诺沃克病毒VP1蛋白，并对VP1蛋白和灭活的诺如病毒具有高度的检测特异性。
创造性及先进性：1)通过生物信息学和蛋白机构和序列分析，鉴定沙门氏菌和诺沃克病毒表面蛋白的特异区域，开发针对此区域的特异性单克隆抗体；2)建立食品中诺沃克病毒微滴式数字PCR定量检测方法；3)开发出利用研究获得的特异性单克隆抗体，而研制的沙门氏菌横流层析免疫胶体金试纸，该横流试纸快速检测方法将用于现场检测；4)建立基于纳米多孔膜和石墨烯量子点的电化学生物传感器快速检测沙门氏菌的检测方法，和光电化学免疫生物传感器快速超灵敏检测诺如病毒的检测方法。
技术的成熟程度及存在问题：1) 获得高特异性的、可实用性的沙门氏菌、诺如病毒单克隆抗体；2）建立并在实验室中验证和模拟实验了：沙门氏菌、诺如病毒横流层析胶体金快速筛查方法；沙门氏菌、诺如病毒电化学生物传感器快速检测方法；生鲜西生菜中GII型诺如病毒富集及微滴式数字PCR定量检测方法等5项快速检测方法。3）完成沙门氏菌横流层析快速筛查试纸试剂盒样机的研制，进入小试阶段，并对性能及实际检测情况开展了应用验证。 |
| 联系人： |
翁文川 |
成果登记日期： |
2018-10-08 |
| 联系人email： |
wengvin@iqtc.cn |
单位代码： |
94405992 |
| 邮政编码222： |
510623 |
联系人电话： |
020-38297002 |
| 单位传真： |
020-38290479;38290439;38290950 |
单位通讯地址： |
广东省广州市天河区珠江新城花城大道66号广东国检大厦B座 |
| 单位所在省市： |
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单位电话： |
020-38290479;38290452;38290951 |
| 转让收入（万元）： |
0 |
单位属性： |
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| 合作完成单位： |
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已转让企业数（个）： |
0 |
| 成果发布年份： |
2018 |
知识产权形式： |
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| 成果完成人： |
翁文川;陈声;易蓉;邱家琪;凌莉;袁慕云;林大川;李瑞超;郭九标;李志勇 |
资源采集日期： |
2019-04-15 |
