近年来在美国和以色列普通鲤鱼和锦鲤中分离了一种新的疱疹病毒，命名为锦鲤疱疹病毒(KHV)或鲤鱼肾炎鳃坏死病毒(CNGV)。该病在水温18-28℃时发病，死亡率很高，给世界锦鲤观赏业和鲤鱼饲养业造成了巨大的经济损失。 2002年和2004年，广东和海南某养殖锦鲤发生暴发性疾病，死亡率达80%以上。将病鱼的脑、肝、脾和肾等组织悬液接种到CO、CK和EPC等鱼类细胞系中，均未发现有细胞病变。本室合成锦鲤疱疹病毒（KHV）的两对引物KHV9/5F和KHV9/5R，KHV1和KHV2，用嵌套式聚合酶链式反应（nested-PCR）在脑和脾脏组织的抽提物中扩增出长度为412 bp的特异性DNA片段。将该片段的nested-PCR扩增产物纯化后，进行克隆、测序。用NCBI-Blast软件将测序结果在Genbank中进行比较分析，结果发现与注册号为AF411803的KHV基因序列部分片段有99%的同源性。用肾脏组织匀浆上清人工感染健康锦鲤，并从试验感染鱼组织中检测到KHV病毒DNA。该检测结果表明，KHV或CNGV已经传播到我国，应引起高度重视。 本研究利用Taqman探针技术建立了锦鲤疱疹病毒（KHV）实时荧光定量PCR检测方法。选取KHV病毒TK基因的保守区域（GenBank AF218266），利用PRIMER EXPRESS 2.0设计特异性的引物和荧光探针。利用阳性样品克隆质粒进行定量PCR反应，制作标准曲线，得到病毒拷贝数与Ct值的关系为：Ct=-3.45lgX+42.73（相关系数R2=0.989）。定量PCR可以检测到32个KHV病毒粒子，表明其具有高度的灵敏性。引物和探针对于其它鱼类病毒和其它鱼类细胞系都没有特异性扩增，具有良好的特异性。实时定量PCR检测KHV方法的建立，在KHV的临床检测和流行病学调查方面具有重要意义。 2003年～2005年间，对全国各地送检的269份鲤科鱼类样品进行检测用该方法检测出阳性样品26份，阳性检出率为9.67％。检测的所有送检的金鱼和鲫鱼样品均为阴性。52份锦鲤样品中，检出KHV阳性19份，阳性检出率为15.4％。

近年来在美国和以色列普通鲤鱼和锦鲤中分离了一种新的疱疹病毒，命名为锦鲤疱疹病毒(KHV)或鲤鱼肾炎鳃坏死病毒(CNGV)。该病在水温18-28℃时发病，死亡率很高，给世界锦鲤观赏业和鲤鱼饲养业造成了巨大的经济损失。 2002年和2004年，广东和海南某养殖锦鲤发生暴发性疾病，死亡率达80%以上。将病鱼的脑、肝、脾和肾等组织悬液接种到CO、CK和EPC等鱼类细胞系中，均未发现有细胞病变。本室合成锦鲤疱疹病毒（KHV）的两对引物KHV9/5F和KHV9/5R，KHV1和KHV2，用嵌套式聚合酶链式反应（nested-PCR）在脑和脾脏组织的抽提物中扩增出长度为412 bp的特异性DNA片段。将该片段的nested-PCR扩增产物纯化后，进行克隆、测序。用NCBI-Blast软件将测序结果在Genbank中进行比较分析，结果发现与注册号为AF411803的KHV基因序列部分片段有99%的同源性。用肾脏组织匀浆上清人工感染健康锦鲤，并从试验感染鱼组织中检测到KHV病毒DNA。该检测结果表明，KHV或CNGV已经传播到我国，应引起高度重视。 本研究利用Taqman探针技术建立了锦鲤疱疹病毒（KHV）实时荧光定量PCR检测方法。选取KHV病毒TK基因的保守区域（GenBank AF218266），利用PRIMER EXPRESS 2.0设计特异性的引物和荧光探针。利用阳性样品克隆质粒进行定量PCR反应，制作标准曲线，得到病毒拷贝数与Ct值的关系为：Ct=-3.45lgX+42.73（相关系数R2=0.989）。定量PCR可以检测到32个KHV病毒粒子，表明其具有高度的灵敏性。引物和探针对于其它鱼类病毒和其它鱼类细胞系都没有特异性扩增，具有良好的特异性。实时定量PCR检测KHV方法的建立，在KHV的临床检测和流行病学调查方面具有重要意义。 2003年～2005年间，对全国各地送检的269份鲤科鱼类样品进行检测用该方法检测出阳性样品26份，阳性检出率为9.67％。检测的所有送检的金鱼和鲫鱼样品均为阴性。52份锦鲤样品中，检出KHV阳性19份，阳性检出率为15.4％。